rna干扰livin基因的表达对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响研究

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1、万方数据中图分类号R23Z!!垒UDC61O博士学位论文学校代码!Q533RNA干扰Livin基因的表达对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响研究EffectsofRNAinterferenceinApoptosisInhibitorLivinonBladderCancerCellApoptosisandCellCycle作者专业：刘默睦：临床医学研究方向：泌尿外科学学院(系、所)：湘雅医学院指导教师：赵晓昆副指导教师：王荫槐论文答辩日期翌望!孕一答辩委员会主席中南大学二O一四年五月万方数据原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了

2、论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：堑：l盟目≥学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待

3、解密后适应本声明。作者签名：导师签名盥日期：立灶年兰月生日万方数据八年制博士学位论文中文摘要RNA干扰Livin基因的表达对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响研究摘要凋亡抑制蛋白(InhibitorofApoptosisProtein，IAPs)是生物体内一类包含高度保守的BIR结构域的内源性抗细胞凋亡因子。Livin是近年来lAPs家族最新发现的成员，其分子结构包含1个BIR结构域和1个RING指结构域。Livin在正常成人组织中基本不表达，在许多肿瘤中高表达，被认为是肿瘤预后不良及药物抵抗的重要影响因素。研究表明Livin不但具有抗细胞凋亡作用，其分子结构包含的RING指结构域还赋予其泛

4、素结合酶样活性，在细胞周期的调节上也有重要作用。国内关于Llvin在膀胱癌中的表达情况，对其预后和化疗药物抗性的研究目前仍然较少。Livin的表达对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响有待进一步研究。目的：(1)设计针对Livin的高效特异性siRNA并进行筛选，作为进一步实验研究的工具。(2)通过对人膀胱癌T24细胞系中Livin基因表达的RNA干扰，抑制Livin基因的表达，观察Livin基因表达下降对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：(1)通过siRNA设计软件及siRNA数据库等工具设计出Livin基因特异性的siRNA。通过RT-PCR和Westernblot等方法观察其抑l

5、I万方数据八年制博士学位论文中文摘要制Livin基因在人膀胱癌T24细胞系中表达的效率，筛选出具有高效性特异性的siRNA。(2)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达，通过双变量流式细胞仪计数，检测Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响。(3)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达，用过流式细胞仪计数，检测抑制Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞的细胞周期的影响。结果：1．Livin特异性siRNA的筛选使用siRNA设计软件和siRNA数据库获得3种siRNA，通过RT-PCR和Westemblot对每种siRNA在T24细胞中干扰效率进行

6、检验，结果表明3种siRNA均能较显著的抑制Livin基因在T24细胞中的表达，其中1种能够显著的降低Livin基因的表达。2．Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响双变量流式细胞计数显示，Livin基因表达下降，导致T24细胞自发性凋亡出现明显增高。3．Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞周期的影响流式细胞计数显示Livin基因表达下降，导致T24细胞周期明显停滞于G2／M期。结论：1．Livin基因在T24细胞中的表达抑制，可以提高T24细胞自发性凋亡的发生率。III万方数据八年制博士学位论文英文摘要TheEffectsofRNAinterferenceinLiv

7、inGeneonBladderCancerCellApoptosisandCellCycleAbstractInhibitorofApoptosisProtein(IAPs)isaclassofanti-apoptoticfactorinvivo．LivinisanewlydiscoveredmemberofIAPs，almostno．。‘haladulttissues，butishi’ly)ressed‘manynoexpress