nucleostemin基因特异性rna干扰对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

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1、Nucleostemin基因特异性RNA干扰对胃癌细胞增殖和凋亡的影响作者：郑学芝，胡静，孙卫，刘桂莲，刘晓霓，蔡子微【摘要】目的探讨应用RNA干扰技术抑制nucleostemin(NS)基因表达对胃癌SGC7901细胞株增殖和凋亡的影响。方法阳离子脂质体法将构建好的NSsiRNA表达载体转染胃癌SGC7901细胞株，采用MTT法测试各组细胞增殖抑制率；RTPCR法检测各组细胞NS基因表达情况，流式细胞术检测细胞周期，AnnexinVFITC/PI法检测细胞凋亡率。结果与对照组相比，S组细

2、胞的增殖减慢，24、48、72h细胞增殖抑制率分别为53.21%、71.54%、87.47%；NS基因表达量下降，G0/G1期细胞百分率显著升高(58.34%)，S期细胞减少(20.68%)，细胞凋亡率增加(26.85%)。结论RNA干扰技术可抑制胃癌SGC7901细胞株NS基因的表达，使细胞增殖减慢，细胞周期阻滞在G0/G1期，凋亡率增加。【关键词】RNA干扰；nucleostemin；胃癌；细胞增殖；凋亡ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectonprol

3、iferationandapoptosisbyRNAinterferencetoinhibitNucleostemin(NS)geneexpressioningastriccarcinomaSGC7901cells.MethodsTheNSsiRNAexpressionvectorwas10transfectedintogastriccarcinomacellswithLipofectamineTM2000reagent.Thenwedetectedthecellproliferationinh

4、ibitionratiobyMTTassay,thelevelsofNSgeneexpressioninallgroupsbyRTPCR,cellcyclebyflowcytometry,cellapoptosisratiobyAnnexinVFITC/PIkit.ResultsComparedwiththatinthecontrolgroup,cellproliferationinSgroupdecreased;at24,48and72hthecellproliferationinhibiti

5、onratiowas53.21%,71.54%and87.47%,respectively,thelevelofNSgeneexpressionreducedinSgroup.G0/G1phasecellwas58.34%,Sphasecellwas20.68%,andthecellapoptosiswas26.85%.ConclusionRNAinterferencecouldsubstantiallyinhibitNSgeneexpressioningastriccarcinomaSGC7901

6、cells,decreasecellproliferation,arrestcellcycleandincreaseapoptosisratio.KEYWORDS:RNAinterference;nucleostemin;gastriccarcinoma;cellproliferation;apoptosis10NS基因是新发现的一种蛋白质核因子。该基因在人类的数种肿瘤细胞中表达丰度很高，但在分化的成体组织中却不表达。研究者认为NS基因有可能决定干细胞和肿瘤细胞的自我复制能力[1]。随着研究的深入，N

7、S基因在调节干细胞和肿瘤细胞的增殖和分化中的作用引起了愈来愈多的关注，有可能是理想的肿瘤标志物及基因免疫治疗的靶点。本实验采用RNA干扰技术，以胃癌SGC7901细胞株中NS基因作为靶点来研究胃癌细胞增殖及凋亡情况的变化。1材料与方法1.1材料胃癌SGC7901细胞株购自中科院上海细胞所。PCDNA4/CNSsilencer质粒[2]由本室构建并保存。RPMI1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT、DMSO购自Gibco公司。LipofectamineTM2000Reagent、Zeoci

8、n购自Invitrogen公司。AnnexinVFITC/PI试剂盒购自BD公司。RTPCR试剂盒购自TaKaRa公司。引物合成及PCR产物测序由上海申能博彩生物科技有限公司完成。1.2细胞培养和转染胃癌SGC7901细胞培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基中，置于37℃、50mL/LCO2潮湿空气的培养箱内培养，48h细胞贴壁后，更换培养液，然后2～3d传代1次，以维持细胞处于对数生长期。转染前1d将细胞接种到24孔板上，按每