rna干扰mbp-1基因对胃癌细胞sgc-7901增殖影响

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1、RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响耿晢1,　姚海燕1,韩跃武1,(1兰州大学基础医学院生物化学及分子生物学研究所甘肃兰州730000)基金项目：兰州大学“中央高校基本科研业务费专项资金”自由探索项目，项目编号lzujbky-2012-187.【摘要】目的：探讨MBP-1基因表达沉默对胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖影响。方法：实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列组）和干扰组（转染MBP-1shRNA组）.设计2条针对MBP-1基因的小干扰RNA片段及1条

2、阴性对照siRNA,并构建入pSIREN-retroQ质粒。将构建的重组pSIREN-retroQ质粒通过Lipofectamine2000脂质体转染胃癌SGC-7901细胞，通过嘌呤霉素筛选构建稳转株细胞。RealtimeRT-PCR和westernblot分别检测MBP-1表达。MTT法对MBP-1干扰后对SGC-7901细胞增殖的影响进行检测。结果：通过PCR扩增阳性克隆及测序，说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组pSIREN-retroQ质粒。通过Lipofectamine2000脂质体将重组质粒转

3、染胃癌SGC-7901细胞，并通过嘌呤霉素筛选两周，说明已成功构建MBP-1干扰及对照SGC-7901稳转株细胞。通过RealtimeRT-PCR检测，干扰组MBP-1mRNA相对表达量与空白对照组相比都显著下调（P＜0.05）。通过westernblot检测检测MBP-1蛋白表达，干扰组MBP-1的表达量与空白对照组相比也都显著下调（P＜0.05）。MTT法检测结果表明，MBP-1干扰组细胞在24、48、72、96和120小时增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P＜0.05）。结论：MBP-1基因表达能抑制

4、胃癌细胞SGC-7901的增殖，推测MBP-1基因可能成为胃癌基因治疗的一个新靶点。【关键词】胃癌细胞；RNA干扰；MBP-1；细胞增殖；EffectsofMBP-1geneexpressiondownregulationbyRNAinterferenceontheproliferationofgastriccancercelllineSGC-7901.GengZhe1,YaoHaiyan1,HanYuewu1,（1Instituteofbiochemistryandmolecularbiology,Lanz

5、houmedicalcollege,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China）【Abstract】Objective:Toinvestigatetheeffectsofc-mycpromoterbindingprotein(MBP-1)geneontheproliferationinvitroinhumangastriccancercelllineSGC-7901.Methods:Cellsdividedintothreegroups：blankcontrolgroup(un

6、transfectedcells)，negativegroup(cellstransfectedwithmissensesequence)andexperimentalgroup(cellstransfectedwithMBP-1shRNA)．TwoMBP-1shRNAsequencesandonenegativecontrolshRNAsequenceweredesigned,synthesizedandclonedintopSIREN-retroQplasma.Thentherecombinantplas

7、midswereconstructedandtransfectedintohumangastriccancerSGC-7901cellsbyLipofectamine2000．Afterselectionofcellswithpuromycinfortwoweeks,stablecelllineSGC-7901expressinggeneofMBP-1specificshRNAwasobtained.TheexpressionsofMBP-1mRNAandproteininSGC-7901weredeterm

8、inedbyRealtimePCRandWesternblotting,respectively.TheeffectsofalteredexpressionofMBP-1oncellproliferationweremeasuredbyMTTcellproliferationassay.Results:PCRandsequencingindicatedthattherecombinantplasmi