rna干扰对大鼠腰椎间盘细胞fas表达及细胞凋亡的影响

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1、广东医学2013年12月第34卷第23期GuangdongMedicalJournalDec．2013，Vo1．34，No．23·3547·RNA干扰对大鼠腰椎问盘细胞Fas表达及细胞凋亡的影响术张惠煊，马翰斐，陈少初，叶伟，刘尚礼‘广东省深圳市龙华新区人民医院骨科(518109)；中山大学孙逸仙纪念医院骨科(广州510120)【摘要】目的探讨RNA干扰技术对大鼠腰椎间盘细胞Fas表达及细胞凋亡的影响。方法利用脂质体将Fas—siRNA转染进入大鼠腰椎间盘细胞，通过荧光定量RT—PCR检测FasmRNA的表达，Westernblot检测Fas蛋白的表达，

2、倒置相差显微镜下观察与FasL共培养后椎间盘细胞的形态，流式细胞仪检测椎间盘细胞凋亡情况。结果转染Fas—siRNA2的大鼠腰椎间盘细胞，其FasmRNA及蛋白表达、细胞凋亡率均较未转染的大鼠腰椎间盘细胞明显降低(P<0．01)。结论siRNA能有效抑制大鼠腰椎间盘细胞Fas基因的表达，利用RNA干扰的方法降低Fas的表达可减少FasL导致的椎间盘细胞的凋亡。【关键词】椎间盘退变；RNA干扰；Fas；凋亡TheefectsofRNAinterferenceonFasexpressionandapoptosisofintervertebraldisccel

3、lsinrats．ZHANGHui—xuan，MAHan-fei，CHENShao—chu，YEWei，LIUShang—li．。DepartmentofOrthopaedics，LonghuaRenminH0spt—taZ，Shenzhen518109，ina【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofRNAinterferenceonFasexpressionandapoptosisofintervertebraldisccellsinrats．MethodsFas—siRNAwastransfectedintothe

4、ratintervertebraldisccellsbyliposome．Theexpres—sionlevelofFasmRNAandproteinweremeasuredbyRT—PCRandWesternblot，respectively．ThecellularmorphologieobservationoncellswithFasLculturingwasperformedbyinvertedmicroscope．Thecellapoptosisratewasassessedwithfloweytometry．ResultsThemRNAandp

5、roteinofFas，andapoptosisrateweresignificantlyreducedinFas—siRNA2transfectedcells(P<0．01)．ConclusionFasmRNAissuccessfullysilencedbysiRNAinintervertebraldisccells，whichcanreducetheapoptosisofintervertebraldisccellsinvitro．【Keywords】intervertebraldiscdegeneration；RNAinterference；Fas

6、；apoptosis椎间盘退变性疾病(degenerativediscdisease)是骨中心赠送，特优级胎牛血清(FBS)购自Hyclone公司，科常见病多发病，是由椎间盘退变(intervertebraldisc转染试剂Lipofeetamine2000(Lipo2000)和优化培养基degeneration)引起的以颈肩腰腿痛为主要表现的一系(OptiMEMI)购自Invitrogen公司，青链霉素混合液列临床综合征。引起椎间盘退变的原因尚未完全明购自Sigma公司，倒置相差显微镜购自Nikon公司，荧了，一般认为是多方面、多层次的。近年来研究发光

7、定量RT—PCR试剂盒购自TaKaRa公司，细胞凋亡现，退变椎间盘中存在着明显的细胞凋亡，并认为是打试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。本实验破椎间盘代谢失衡的一个重要因素。众多研究发所用相关siRNA均由广州市锐博生物科技有限公司设现-6]，Fas／FasL(Fasligand)系统是椎问盘细胞主要计合成。合成后的siRNA为冻干粉，是由正义链和反的凋亡途径，因此打断Fas／FasL系统，减少椎间盘细义链组成的2lbp双链RNA。两条链3端均带有2个胞的凋亡有望成为阻止椎间盘退变的手段。利用突出的碱基(dTdT)。按说明将其溶人去离子无RNARNA

8、干扰(RNAinterference，RNAi)手段可以特异性地酶水中以20~m