rna干扰抑制人肺腺癌耐药细胞a549ddp的ercc2基因表达的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文RNA干扰抑制人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的ERCC2基因表达的研究姓名：张琼申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：周航201205遵义医学院硕士学位论文RNA干扰抑制人肺腺癌耐药细胞A549／DDP的ERCC2基因表达的研究RNA干扰gPN人肺腺癌耐药细胞A549／DDP的ERCC2基因表达的研究摘要目的：探讨RNA干扰技术沉默切除修复交叉互补基因组2(Excisionrepaircrosscom．plimentarygroup2，ERCC2)在人肺腺癌耐药细胞A549／DDP@的表达，为非小细胞肺癌的基因治疗提供实验依据。方法：体外设计及合成靶向人的ERCC2

2、基因的小干扰RNA(siRNA)，包括：ERCC2一siRNAl、ERCC2一siRNA2、ERCC2．siRNA3、ERCC2．siRNA4和阴性对照组(NCERCC2．siRNA)，构建携带ERCC2．shRNA的质粒表达载体，通过阳离子聚合物EndoFectinTMLenti转染人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP中，用荧光显微镜观察并测定转染效率；real．timePCR检测转染后ERCC2rnRNA的表达情况。结果：1、A549／DDP细胞转染后48h，在荧光显微镜下观察到各转染组均有不同比例的eGFP表达，空白对照组无eGFP表达，转染效率最佳的是ERCC2一siRNA2(83．4

3、5±3．27％)。2、分别于转染24h、36h、48h后收获细胞，用real．timePCR检测不同ERCC2．siRNA片段转染A549／DDP细胞后ERCC2mRNA的表达情况。转染24h后，ERCC2mRNA相对表达量在ERCC2一siRNAl组为(O．8214-O．112)、ERCC2一siRNA2组为(O．4524-O．087)、ERCC2-siRNA3组为(O．5914-0．127)、ERCC2．siRNA4组为(O．785土O．135)，其与空白对照组、NCERCC2．siRNA组比较，ERCC2mRNA表达均下调，有统计学意义(P<0．05)，而ERCC2．siRNA2组有显

4、著差异(P<0．01)；转染36h后，ERCC2mRNA相对表达量在ERCC2一siRNAl组为(0．8184-0．101)、ERCC2一siRNA2组为(O．3584-O．097)、ERCC2一siRNA3组为(0．5764-0．081)、ERCC2．siRNA4组为(0．7724-O．174)，其与空白对照组、NCERCC2．siRNA组比较，ERCC2mRNA表达均下调，有统计学意义(P<0．05)，而ERCC2一siRNA2组有显著差异(P

5、O．2934-O．118)、ERCC2一siRNA3组为(O．5644-0．086)、ERCC2一siRNA4组为(O．7634-0．078)，其与空白对照组、NCERCC2一siRNA组比较，ERCC2mRNA表达均下调，有统计学意义(P<0．os)，而ERCC2一siRNA2组有显著差异(P<0．01)。结论：1本实验设计及合成的质粒表达载体可被阳离子聚合EndoFectinTMLenti成功2一转染人肺腺癌耐药细胞A549／DDP中。2RNA干扰技术可部分下调人肺腺癌耐药细胞A549／DDP中ERCC2mRNA基因表达水平。3构建的靶序列中ERCC2一siRNA2的干扰沉默效果最佳。关

6、键词：RNA干扰；人肺腺癌耐药细胞；ERCC2基因；A549／DDP3遵义医学院硕士学位论文RNA干扰抑制人肺腺癌耐药细胞A549／DDP的ERCC2基因表达的研究StudyofRNAinterferencesuppressionERCC2geneexpressioninhumanlungadenocarcinomaresistantcellsABSTRACTobjective：ExploretheRNAinterferenceexcisionrepaircrosscomplementinggroup2inthehumanlungadenocarcinomaresistantcellsA54

7、9／DDPofexpression，toprovideex—perimentalevidenceforNon-smallcelllungcancergenetherapy．Methods：ERCC2geneinvitrodesignandsynthesisoftargetedpeople，includingsmallinterferingRNA(siRNA)：ERCC2一siRNAl，ERCC2一siRNA2