RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究-论文.pdf

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1、广西医学2014年5月第36卷第5期549RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究▲吴琼黄文涛黄怡廖柳凤谭晓红徐恒(1广西医科大学附属肿瘤医院药学科，南宁市530021，E—mail：wuqiongl919@163．com；2广西医科大学研究生学院，南宁市530021)【摘要】目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达，探索该技术干预肝癌的可行性。方法制备4个针对人POLD1基因的shRNA表达质粒，转染SMMC-7721细胞48h后，荧光定量PCR法检测POLD1基

2、因的表达，CCK一8检测细胞生长情况。结果测序鉴定证实4个shRNA表达质粒构建成功，将其转染SMMC-7721细胞后，NEO—POLD1—1和NEO—POLD1-4表达质粒抑制效果明显，使SMMC-7721细胞的增殖受到抑制，并且使POLD1基因表达在mRNA水平抑制，NEO—POLD1—1相对表达量为(0．1425±0．0205)，NEO—POLD1-4相对表达量为(0．209±0．009)。结论针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖，且实现RNA干扰

3、具有序列选择性。【关键词】肝肿瘤；POLD1基因；RNA干扰技术【中图分类号】R735．7【文献标识码】A【文章编号】0253—4304(2014)05．0549—03DoI：10．11675／j．issn．0253—4304．2014．05．01InhibitionofPOLD1GeneExpressionbyRNAInterferinginHumanLiverCancerCellswuQiong，HUANGWen—tao，HUANGYi，LIAOLiu-feng，TANXiao．hong，XUIteng。(1

4、DepartmentofPharma．y，AfiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUnive~ity，Nanning530021，China；2GraduateSchoolofGuangxiMedicalUnive~ity，Nanning530021，China)【Abstract】ObjectiveToinvestigatethefeasibilityofRNAinterfering(RNAi)onlivercancerbyusingthistechniquetoinhibi

5、ttheexpressionofPOLD1geneinhumanlivercancerceHsSMMC-7721．MethodsFourexpressionplasmidswithshRNAstargetingPOLD1genewereconstructed，andthentheplasmidsweretransfectedtoSMMC-7721for48hours．TheexpressionofPOLD1genewasdetectedbyreal—timeRT—PCR．CCK-8assaywasusedtoan

6、alyzethechangeofcellproliferation．ResultsThefourexpressionplasmidswereconstructedsuccessfully，confirmedbysequencing．AftertheplasmidsweretransfectedtoSMMC-7721，thecellproliferationWassignificantlyinhibitedinNEO—POLD1—1andNEO—POLD1-4．ThemRNAexpressionofPOLD1gen

7、einNEO—POLD1-1andNEO—POLD1—4weresignificantlyinhibitedas(O．1425±0．0205)and(0．2094-0．009)．CondusionshRNAstargetingthePOLD1genecaninhibitthemRNAexpressionofPOLD1geneandlivercancercellproliferationinvitro，andtheRNAinterferingissequencingalternative．【Keywords】Liv

8、ecancer；POLD1gene；RNAinterferingtechnique小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)又POLD1基因功能被抑制后是否能抑制肿瘤细胞的增称为短干扰RNA(shortinterferingRNA)或沉默RNA殖的研究还未清楚。据此本实验制备4个特异性人(silencingRNA)，其能高效特异性地抑制哺乳动物细P