RNA干扰沉默HOXA2基因表达对肝癌细胞株行为的影响-论文.pdf

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1、·l54·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Feb；49(2)RNA干扰沉默HOXA2基因表达对肝癌细胞株行为的影响胡晓瑁，王一成，欧伶摘要目的研究同源异型盒A2(HOXA2)基因对肝癌细在生物发育过程中发挥重要作用，其异常表达参与胞生长、细胞周期及凋亡的影响，探讨其作为潜在肝癌治疗人类多种恶性肿瘤的发生、发展及预后I4。HOX靶点的可行性。方法采取实时定量PCR和逆转录PCR检基因分为HOXA、HOXB、HOXC和HOXD四簇，测HOXA2基因的表达情况；s

2、iRNA干扰HOXA2基因在肝癌各簇分别定位于不同染色体的特定区域，其中HOX细胞株PLC／PRF／5、MHCC一97L中表达，通过CCK一8评价肝A定位于7p15．3。该基因表达蛋白具有DNA细胞肝癌细胞株增殖情况，采用软琼脂克隆形成试验评价锚结合及转录因子活性，通过结合在DNA相应位置并泊非依赖生长情况，流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。启动相关基因转录从而调控胚胎及成体细胞增殖、结果实时定量PCR和逆转录PCR检测结果显示HOXA2基因在肝癌组织中表达上调(P<0．05)。针对HOXA2基因分化。该基因异常表

3、达会导致异常形态结构的形设计合成siRNAs能够特异性沉默HOXA2基因在肝癌细胞成，进而导致细胞恶性转化为肿瘤。该文通过株PLC／PRF／5、MHCC一97L中的表达，在干扰了HOXA2基因对HOXA2基因在肝癌中功能研究，为进一步研究表达后肝癌细胞株的软琼脂克隆形成能力和肝癌细胞增殖可能的肝癌分子标志物或肝癌治疗靶点提供理论依能力均受到不同程度的抑制。流式细胞结果表明，干扰据HOXA2基因表达能够减缓细胞周期进展，使肝癌细胞阻滞于G期，并且s期减少。AnnexinV和PI双染色细胞凋亡1材料与方法实验表明，干扰

4、HOXA2基因能促进肝癌细胞凋亡。结论1．1标本来源收集2006年1月～2011年11月HOXA2基因可以较显著影响肝癌细胞增殖和凋亡。无锡市人民医院部分住院肝癌患者手术切取病灶及关键词RNA干扰；同源异型盒基因；肝癌；细胞周期；细胞周围5cm以外的组织分别作为癌组织和相应的癌凋亡旁组织，放入液氮中并移至一80℃冰箱保存。所获中图分类号Q291文献标志码A文章编号1000—1492(2014)02—0154—06取的原发性癌灶及癌旁的诊断均以病理诊断为最终依据。依据埃德曼(Edmondson)分级标准，临床手肝细胞

5、肝癌的发生发展多伴有逐步增加的遗传术获得的肝癌样本大多数为Ⅱ一Ⅲ级。本研究所用不稳定性，包括基因组不稳定性和微卫星不稳定到的组织样本(约1cm)均来源于患者的原发性癌性。同源异型盒基因(homeoboxgenes，HOX)，灶和癌旁组织，共63例，男52例，女11例，年龄30～75(60±8)岁。每例样本的获得均符合相关的伦2013—08—08接收理学规定。基金项目：上海市自然科学基金(编号：07ZR14082)1．2方法作者单位：。华东理工大学生物工程学院，．E海2002371．2．1组织RNA抽提首先将匀浆所用

6、器皿进行上海南方模式生物研究中心，上海201203去除RNA酶处理，用焦碳酸二乙酯(DEPC)水浸泡作者简介：胡晓瑶，女，硕士研究生；欧伶，男，副教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：ouling数分钟后，200c【=烘干4h；待器皿冷却至室温后，加@ecust．dt1cn入液氮预冷。将组织从液氮中迅速取出研磨成粉末SP600125remarkablyinhibitedtheactivationofJNK1／2andincreasedthecellgrowthinhibitoryrateandapoptosis

7、rateinMCF一7cellsinducedbyhighglucosecomparedwiththosetreatedwithhighglucoseonly．ConclusionHighglucosecanstimulatetheproliferationofMCF一7cellsinvitro．InhibitionofJNKsignalingpathwayinMCF一7cellscansignificantlyinhibitecellproliferationandpromoteapoptosis．JNKsign

8、alingpathwaymayplayanimpor—tantroleinthehighglucose·inducedproliferationofMCF-7cells．Keywordse-junN—terminalkinase(JNKl／2)；specificJNKinhibitor(SP600125)；breastcancer；cellapopto—si