资源描述：
《沉默cxcr4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、阻断沉默CXCR4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭转移的体外实验研究王铮，李徐奇，徐军，仵正，张东，沙焕臣，马清涌(710061西安，西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科)[摘要]目的利用RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体，观察CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖、及侵袭能力的变化。方法在不同分化程度胰腺癌细胞株中筛选出CXCR4高表达胰腺癌细胞株，RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体，转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株，Real-timePCR、We
2、sternblot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率；MTT实验、检测CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖，应用Transwell侵袭小室观察CXCR4干扰对胰腺癌细胞侵袭转移力的影响。P<0.05被认为具有显著差异性。结果胰腺癌细胞株Miapaca-2CXCR4表达异常增高，特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达，抑制效率达70%以上，。同时，特异性CXCR4shRNA能够抑制细胞生长，细胞达到对数生长期的时间延长(P<0.05)，此外，。Transwell
3、实验证明CXCR4基因干扰后细胞侵袭能力减低(P<0.05)，即使SDF-1的刺激也不能够使细胞侵袭能力增加。结论成功构建了针对胰腺癌细胞CXCR4表达的siRNAi抑制载体，；CXCR4基因沉默能抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和成瘤能力，为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据。[关键词]CXCR4;胰腺癌;侵袭转移[中图法分类号]R735.9[文献标志码]ATheeffectsofCXCR4inhibitedbyRNAinterferenceonpancreaticcancerproliferationan
4、dinvitroWangZheng,LiXuqi,XuJun,WuZheng,ZhangDong,ShaHuanchen,MaQingyong(DepartmentofHepatobilarySurgery,theFirstAffiliatedHospital,MedicalCollegeofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an,Shaanxi,710061,China)[Abstract]ObjectiveExtra-pancreaticmetastasisisadifficultpr
5、oblemforsurgicalinterventiononpancreaticcancer.CXCR4wasconsideredasanimportantroleinthisprocess.TheaimwastoobservetheinfluenceofCXCR4knockdownonpancreaticcancercellgrowth,cellcycle,celltumorigenesis,cellinvasiveability.MethodsRNAitechniquewasappliedtoconstr
6、ucttheCXCR4shRNAexpressionvector.Lipofecatime2000wasusedtotransfecttheCXCR4highexpressionpancreaticcancercellMiapaca-2.Realtime-PCRandWesternBlotwereusedtoobservetheinhibitoryeffectofRNAionCXCR4expression.MTTassaywasappliedtoassesstheinfluenceofspecificCXCR
7、4shRNAoncellgrowth;Transwellmethodwastoobservethecancercellinvasiveability.P<0.05wasconsideredasstatisticallysignificant.ResultsThroughRNAitechnique,theCXCR4shRNAexpressionplasmidwassuccessfullyconstructed.AfterthetransfectiononCXCR4highexpressionpancreatic
8、cancercelllineMiapaca-2,oneplasmidwhichhasthemostobviouslyinhibitoryeffectinhibitoriesteffectwasselectedinthefollowingexperimentinvitro.InCXCR4shRNAtransfectedcells,cellgrowthwasslowerthanthatofcontrol
