crkl过表达抑制小鼠肝癌hca-p细胞体外增殖,迁移和侵袭能力

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3、淑清教授申请学位级别：硕士学位学科（专业）：生物化学与分子生物学培养单位：大连医科大学基础医学院完成时间：二○一五年三月答辩委员会主席：独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的

4、说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）：1.保密□，在年解密后适用本授权书。2.不保密□。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录一、摘要……………………………………………………………….……1（一）中文摘要…………………………

5、………………………………1（二）英文摘要………………………………………………..….……4二、正文……………………………………………………………….……7（一）前言………………………………………………………….……7第一部分pcDNA3.1-V5/HisB-CRKL和pEGFP-N1-CRKL真核表达质粒构建（二）材料和方法………………………………………………….…....91.材料…………………………………………………....….…...91.1细胞株、菌种来源…………………………………….…...91.2引

6、物、载体…………………………………………….…...91.3主要实验仪器和试剂………………………………….…...91.4溶液配制……………………………………………….….112.方法………………………………………………………......112.1细胞培养………………………………………………......112.2RT-PCR法扩增CRKL目的基因……………………….….112.3pEASY-CRKL克隆质粒的构建及鉴定……………….….142.4pcDNA3.1/V5-HisB-CRKL和pEGFP-N1-CR

7、KL真核表达质粒的构建及鉴定………………………………………………..….…..17（三）结果……………………………………………………...….….191.CRKL基因的扩增……………………………..….………..192.pEASY-bluntsimple-CRKL克隆质粒的酶切鉴定….……..193.pEASY-bluntsimple-CRKL克隆质粒的测序鉴定….……..214.pcDNA3.1/V5-HisB-CRKL和pEGFP-N1-CRKL真核表达质粒的酶切鉴定………………………………………...……

8、…...….…215.真核表达质粒的测序鉴定结果………………………...….22（四）讨论……………………………………………………….….…24（五）结论……………………………………………………..…..…..26（六）参考文献…………………………………………………….….27第二部分CRKL-GFP融合蛋白定位及CRKL过表达对Hca-P细胞体外增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响（