microrna-639通过靶定zeb1抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力

《microrna-639通过靶定zeb1抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R34学校代码：10062密级：学号：2012602038硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：microRNA-639通过靶定ZEB1抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力TITLEmicroRNA-639targetsZEB1tosuppressessthemigrationandinvasioninhepatocellularcarcinomacells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：肖静指导教师：汤华教授天津医科大学研究生院二○一五年五月分类号：R34学校代码：1

2、0062密级：学号：2012602038学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：microRNA-639通过靶定ZEB1抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力TITLEmicroRNA-639targetsZEB1tosuppressesthemigrationandinvasioninhepatocellularcarcinomacells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：肖静指导教师：汤华教授天津医科大学研究生院二○一五年五月学位论文原

3、创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校

4、向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：肝癌是最为常见的原发性肿瘤之一，其发病率在恶性肿瘤中排名第五位，病死率排名第二。随着肝癌病程的发展，其癌细胞易发生转移，是肝癌难以治愈的，死亡率高的主要原因。肝癌的发生、发展与许多因素密切相关，涉及细胞内多种基因表达的改变。microRNA（miRNA）是内源性非编码小RNA分子，能与mRNA的非编码序列互补，介导mR

5、NA的降解或抑制其翻译，是细胞内重要的转录后调控机制。已有研究表明miRNA与肝癌的发生发展密切相关。本实验室前期工作证实，microRNA-639（miR-639）在肝癌中表达下调，并且抑制肝癌细胞的生长和增殖，在肝癌中发挥抑癌基因的功能。本课题进一步探讨miR-639对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响，筛选其下游直接靶基因，探索miR-639在肝癌细胞中发挥抑癌基因的生物学机制。并且结合miR-639和其靶基因ZEB1的功能与肿瘤细胞发生迁移和侵袭的生物学过程，深入探讨了miR-639调控肝癌细胞迁移和侵袭能

6、力的具体分子生物机制，以及可能的调控途径。力求为研究肝癌转移的调控机制提供理论依据。方法：1.利用Transwell小室以及matrigel模拟细胞基底膜，采用Transwell迁移和侵袭实验验证miR-639对肝癌细胞系QGY-7703和HepG2迁移和侵袭能力的影响。2.利用miRBaseTargets、TargetScan和PicTar等软件，筛选miR-639的靶基因，最终我们选择ZEB1作为研究对象。3.设计并构建带有ZEB13’UTR的EGFP报告载体，利用荧光报告载体实验验证miR-639与ZE

7、B1的靶定关系，并结合qRT-PCR和Westernblot实验技术从mRNA水平和蛋白质水平验证了miR-639对ZEB1调控关系。4.研究靶基因的功能，我们构建了ZEB1的过表达和敲降质粒，并通过Transwell迁移和侵袭实验确证ZEB1能够促进肝癌细胞QGY-7703和HepG2细胞的迁移和侵袭能力。然后我们通过对肝癌细胞迁移和侵袭的挽救实验，验证miR-639是否通过直接调控靶基因ZEB1发挥对肝癌细胞迁移和侵袭的调控作用。5.最后，我们利用Westernblot技术检测了miR-639和ZEB1对

8、肝癌细胞EMT转化途径的蛋白标志物E-cadherin、Vimentin和ICAM-1的影响，探索ImiR-639是否通过靶定ZEB1调控EMT途径。结果：过表达miR-639抑制肝癌细胞QGY-7703和HepG2的迁移和侵袭能力。生物信息学方法预测miR-639能够靶定ZEB1基因mRNA的3’UTR区域，荧光报告载体实验确证miR-639直接靶定ZEB1，并且能够从mRNA水平和蛋白质水平负调