cathepsin l通过调控emt影响肿瘤细胞的侵袭迁移能力

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1、硕士学位论文论文题目CathepsinL通过调控EMT影响肿瘤细胞的侵袭迁移能力研究生姓名张庆青指导教师姓名梁中琴专业名称药理学研究方向肿瘤药理论文提交日期2013年4月CathepsinL通过调控EMT影响肿瘤细胞的侵袭迁移能力中文摘要CathepsinL通过调控EMT影响肿瘤细胞的侵袭迁移能力中文摘要目的：本研究旨在探讨经转化生长因子-β（TGF-β）刺激后，溶酶体组织蛋白酶L(CathepsinL)通过调控EMT，影响上皮源性肿瘤细胞的侵袭迁移能力。方法：构建稳定低表达CathepsinL的A549和MCF-7细胞株，用适当剂量的转化生长因子-β（TGF-β）处理细胞，采用划痕法、Tra

2、nswell小室法分别检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力；鬼笔环肽染色的方法检测肿瘤细胞骨架变化；Westernblot及免疫荧光检测EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin的变化；RT-PCR和westernblot检测EMT上游信号通路的相关分子的表达；建立裸小鼠皮下移植瘤模型，观察CathepsinL稳定低表达的细胞株在体内的成瘤能力，运用免疫组化分析法检测各组移植瘤中E-cadherin、N-cadherin的表达情况。结果：划痕、Transwell小室及鬼笔环肽染色结果显示，抑制CathepsinL的表达后，TGF-β诱导引起的细胞迁移、侵袭及运动能力的增强受到了一定程

3、度的抑制。免疫荧光和westernblot结果显示，用CathepsinLshRNA靶向抑制CathepsinL的表达能显著抑制由TGF-β诱导所引起的EMT相关标志蛋白E-cadherin表达的下调和N-cadherin表达的上调。RT-PCR和westernblot结果显示，CathepsinL对EMT的调节与其上游信号分子Snail,p-Akt,Wnt-5a等的表达水平有关。在裸小鼠皮下移植瘤模型中，用CathepsinL稳定低表达的细胞株接种的移植瘤生长能力明显低于正常肿瘤细胞株。免疫组化分析显示，相较于正常肿瘤细胞株，CathepsinL稳定低表达的细胞株的移植瘤中Cathepsin

4、L的表达减少，E-cadherin的表达增加，而N-cadherin的表达则减少，并且凋亡能力更强。结论：TGF-β能诱导CathepsinL的表达，并与其对肿瘤细胞的迁移、侵袭诱导作用相关，其可能的机制是CathepsinL通过调节EMT的上游信号分子Snail,p-Akt,Wnt-5a等表达来调控EMT，从而影响肿瘤细胞的迁移、侵袭能力，提示CathepsinL在调控肿瘤细胞侵袭迁移方面起着重要的作用。本研究结果将为CathepsinL成为肿瘤治疗的有效靶点提供实验依据。关键词：EMT；CathepsinL；侵袭；迁移；肿瘤细胞作者：张庆青指导教师：梁中琴IAbstractDown-reg

5、ulatingofCathepsinLsuppressescancerinvasionandmigrationviainhibitingEMTDown-regulatingofCathepsinLsuppressescancerinvasionandmigrationviainhibitingEMTAbstractObjective:Inthisstudy,weclarifythemechanismofCathepsinLinmodulatingTGF-β–inducedcellmigrationandinvasionviatheregulationofEMT.Methods:Besidesc

6、ellstreatedwithappropriatedoseofTGF-βornot,weestablishedCathepsinLknockdownA549andMCF-7celllinesbytransfectingcellswithCathepsinLshRNAplasmids.Cellabilitytomigratewasmeasuredbywoundmigrationassay,andcellinvasionwasdetectedbytranswellinvasionassay.Theactinremodelingoftumorcellswasassessedwithphalloid

7、i.Reversetranscription-PCR(RT-PCR)andwesternblotservedtostudytreatmenteffectsonE-cadherin,N-cadherinandseveralsignalingassociatedwithEMT.Miceintumoranalysisgroupweresacrificedandtumorswereremovedforth