cathepsin l通过调节nf-κb信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性

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1、硕士学位论文论文题目CathepsinL通过调节NF-κB信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性研究生姓名杨能指导教师姓名梁中琴专业名称药理学研究方向肿瘤药理论文提交日期2013年3月CathepsinL通过调节NF-κB信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性中文摘要CathepsinL通过调节NF-κB信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性中文摘要目的：研究在X射线作用后人胶质瘤细胞系U251和人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中溶酶体组织蛋白酶L(CathepsinL，CTSL)的表达及其在电离辐射诱导的转录因子NF-κB

2、的激活过程中的作用，进一步探讨CathepsinL对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其可能机制。方法：在已建立的U251细胞和MCF-7细胞体外培养体系的基础上，分别构建稳定低表达CathepsinL稳定低表达NF-κB的U251和MCF-7细胞株，用X射线和/或CathepsinL特异性抑制剂Z-FY-CHO处理细胞，采用WesternBlot法检测各处理组中细胞CathepsinL蛋白的表达和NF-κB的核转位水平，免疫荧光法检测各处理组细胞中的NF-κB的胞内分布情况，双荧光素酶报道基因法测定各处

3、理组中NF-κB调节基因转录活性的改变，染色质免疫共沉淀（ChIP）法显示NF-κB入核后参与调节下游靶基因的转录激活水平，碱性彗星试验反映辐射后DNA的损伤修复情况；克隆形成实验检测各处理组细胞的辐射敏感性差异。结果：X射线可诱导U251和MCF-7细胞中CathepsinL活性片段表达及NF-κB核转位水平的升高。WesternBlot、免疫荧光和荧光素酶报告基因检测显示，通过不同方法抑制CathepsinL后，X射线诱导的NF-κB激活受到一定程度的阻滞。ChIP结果显示抑制Cathepsi

4、nL后，X射线诱导的NF-κB与靶基因cyclinD1和ATM启动子的结合水平也相应降低。同时，CathepsinL表达被抑制后再经X射线处理的U251和MCF-7细胞与单纯X射线处理的细胞相比克隆形成率降低。进一步建立稳定低表达NF-κBp65亚基的细胞株进行碱性彗星实验和克隆形成实验，结果显示X射线作用后低表达p65的细胞的DNA损伤不易被修复，克隆形成率明显降低，而使用CathepsinL处理不能增加细胞的辐射敏感性。结论：CathepsinL在一定程度上参与了X射线对NF-κB的激活，抑制

5、CathepsinL可部分阻滞X射线诱导的NF-κB的活性，因此，CathepsinL可通过调控NF-κB信I中文摘要CathepsinL通过调节NF-κB信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性号通路能提高U251和MCF-7细胞的辐射敏感性。本研究为CathepsinL作为肿瘤放疗增敏的有效靶点提供了一定的实验依据。关键词：CathepsinL；NF-κB；辐射敏感性；肿瘤细胞作者：杨能指导老师：梁中琴教授IICathepsinL通过调节NF-κB信号通路影响肿瘤细胞辐射敏感性英文摘要Inhibitio

6、nofCathepsinLreducesradiation-inducedNF-κBactivationinvolvedinradiosensitizationofhumantumorcelllinesAbstractObjective:ToinvestigatewhetherinhibitionofCathepsinLcouldsensitizehumangliomaU251andbreastadenocarcinomaMCF-7cellstoionizingradiation(IR)throu

7、ghregulatingNF-κBactivation.Methods:BesidescellstreatedwithaselectiveinhibitorofCathepsinL,Z-FY-CHOornot,weestablishedCathepsinLknockdownU251andMCF-7celllinesbytransfectingcellswithCathepsinLshRNAplasmids.Westernblottingandimmunofluorescenceassaywereu

8、sedtodetectCathepsinLproteinexpressionandNF-κBtranslocationintumorcellsfollowingIRornot.TheDNAbindingandtranscriptionactivitionofNF-κBintumorcellswasfurtherdeterminedbyLuciferasereporterassay.DNAdamagerepairinp65knockdowncellstreatedwithZ-FY-C