过表达twist基因诱导肺腺癌nci-h1299细胞emt及其对增殖、迁移及侵袭能力的影响

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1、万方数据复旦大学博士学位论文後大学博士学位论文学校代码：10246学号：0556223过表达Twist基因诱导肺腺癌NCI-H1299细胞EMT及其对增殖、迁移及侵袭能力的影响^●^m●一^一‘●tUVerexpressIonorlwlStbeneslnduclngLUngAdenocarcino腿NCI-H1299cellsEMTandtheImpactonProliferation，MigrationandInvasion．院系：上海医学院专业：临床医学(八年制)姓名：沈啸指导教师：王群主任医师导

2、师组成员：蒋伟副主任医师逢旭光主治医师完成日期：2013年4月10日曰一万方数据复旦大学博士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第一部分过表达Twist基因诱导肺腺癌NCI—H1299细胞EMT形态学及蛋白表达变化材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32第二部分过表达Twist基因对NCI-H1299增殖、迁移及侵袭能力的影响材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯58万方数据复旦大学博士学位论文过表达Twist基因诱导肺腺癌NCI-H1299细胞眦及其对增殖、迁移及侵袭能力的影响中文摘要目的：上皮一间质转化(epithelial—mesenchymaltransitions，EMT)是指上皮细胞在一些因素的作用下，失去极性及细胞间紧密连接和黏附连接，获得了浸润性和游走迁移能力，变成具备间质细胞形态和特性的细胞。上皮表型的丧失和间质特性的获得是EMT发生的主要特征，这种表型的转化使肿瘤细胞摆脱细胞间黏附，从而表现得更具侵袭和转移能力。Twist最初被认为是一种

5、在胚胎发育中起关键调控作用的转录因子，广泛参与调控器官生长发育、肿瘤发生、细胞增殖分化等过程，其表达上调可能促进细胞表型向恶性转化，可能是某些恶性肿瘤发生、发展的关键因素。。Twist能够直接诱导EMT，并能间接地影响其他的EMT转录调控因子。本实验通过上调Twist基因，诱导人肺腺癌NCI—H1299细胞发生EMT，并观察其对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法：通过携带有Twistl基因的腺病毒液和阴性病毒液分别感染人肺腺癌NCI—H1299细胞，分为感染组、对照组和空白对照组，观察其形态学改

6、变；qPCR检测5个目的基因：Twistl、E—cadherin、N—cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达情况；WesternBlot检测5个蛋白：Twistl、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达情况；然后以CCK-8实验绘制细胞生长曲线，细胞划痕实验观察其迁移能力，TranswelI实验检测其侵袭能力。结果：1．携带有Twistl基因的腺病毒液成功感染NCI-H1299细胞。2．感染后qPCR检测，感染组Twistl

7、、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达高于对照组，E-cadherin表达与对照组无明显区别。3．感染后WesternBlot检测，感染组Twist、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin蛋白的含量高于对照组，E-cadherin则低于对照组。4．CCK一8实验绘制细胞生长曲线，感染组增殖速度慢于对照组，并具有统计学意义。5．细胞划痕实验，感染组迁移细胞数多于对照组。6．Transwel1实验，感染组迁移值高于对照组，并具有统计学意义。万方数据复

8、旦大学博士学位论文结论：1．过表达Twist基因能诱导人肺腺癌NCI—H1299细胞发生EMT。2．过表达Twist基因使NCI-H1299细胞E-cadherin表达下降，而与间质细胞相关的基因和蛋白表达增强。3．过表达Twist基因使NCI-H1299细胞的增殖能力减弱。4。过表达Twist基因能增强NCI-H1299细胞的迁移能力。5．过表达Twist基因能增强NCI-H1299细胞的侵袭能力。关键词：Twist基因，NCI-H1299细胞，腺病毒