抑制gm130表达对胃癌细胞增殖,侵袭及迁移能力的影响

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1、抑制GM130表达对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响冯阳阳，陈婕，牟玲，苏琳茜，易永芬（重庆医科大学基础医学院病理学教研室，分子医学与肿瘤研究中心，重庆，400016）[摘要]目的分析GM130在不同分化人胃癌细胞系的差异表达，利用小干扰RNA技术来沉默GM130基因，研究其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养三株不同分化程度胃癌细胞系（高分化MKN-28、中分化SGC-7901、低分化MKN-45）WesternBlot和RT-PCR筛选出高表达GM130的细胞株MKN-45、SGC-7901，

2、设计并化学合成、转染、筛选出针对GM130的小干扰RNA片段。通过MTT、Transwell、Matrigel侵袭实验，观测下调GM130后对胃癌细胞株的生物学行为影响，Westernblot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果WesternBlot和RT-PCR检测GM130在MKN-45、SGC-7901细胞中呈现高表达。WesternBlot和qRT-PCR显示在低分化胃癌MKN-45细胞中，GM130-siRNA-519转染组GM130基因的表达水平显著抑制（P﹤0.05）。与对照组

3、相比，抑制转染组细胞其增殖、迁移能力明显下降，穿膜细胞数明显减少，MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平显著降低（P﹤0.05）。结论抑制GM130基因的表达下调可显著降低胃癌细胞的增殖和体外侵袭转移能力。[关键词]GM130；RNA干扰；胃肿瘤；增殖；侵袭；迁移EffectsofGM130genesuppressiononproliferation,invasionandmigrationofhumangastriccarcinomacellFengYang-yang,ChenJie,MuLing,Su

4、Lin-qian,YiYong-fen(DepartmentofPathology，MolecularMedicineandCancerResearchCenter，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing，400016，China)[Abstract]ObjectiveToexploretheexpressionofGM30inthedifferentiationofgastriccarcinomacelllinesandinvestigatetheeffectofsm

5、allinterferenceRNA-mediatedsilcencingoftheGM130geneoncellproliferation,invasionandmigrationofhumangastriccarcinomaMKN-45cellsinvitro.MethodsThreedifferentdifferentiatedgastriccarcinomacelllines(MKN-28,SGC-7901andMKN-45)wereculturedinvitro.WesternblotandR

6、T-PCRanalyseswerecarriedoutinMKN-45cellsandSGC-7901cells,whichhadhighGM130expressionlevels.ThedesignedandchemicallysynthesizedsiRNAtargetingtheGM130genewastransfectedintoMKN-45cells.TheeffectofGM130knockdownonMKN-45cellsproliferationwasdeterminedbyMTTass

7、ay,cellsmigrationwasanalyzedbyTranswellmigrationassay,theinvasionofcellswasdeterminedbyMatrigelinvasionassay.TheexpressionofMMP-2and-9wasalsodetectedattheproteinlevel.ResultsMKN-45andSGC-7901cellsshowedthehigherexpressionofGM130attheproteinandmRNAlevels,

8、soWesternblotwascarriedoutinMKN-45cells,whichhadinvasiveandmetastaticpotential.TheGM130-siRNA-519significantlydecreasedGM130proteinlevelcomparedtotwoothersequencesofthesiRNAtargetingGM130andscrambled.ThedistinctdecreaseofG