儿荼素通过抑制asics对胃癌细胞迁移和侵袭的影响

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1、学校代码10459学号或申请号201212262841密级郅州k%硕士学位论文儿荼素通过抑制ASICs对胃癌细胞迁移和侵袭的影响作者姓名：杜培培导师姓名：张艳教授学科门类:医学专业名称：药理学培养院系：基础医学院成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofCatechinonmigrationandinvasionofgastriccancercellsbyacid-sensingionchannel

2、sBy:PeipeiDuSupervisor:Prof.YanZhangDepartmentofPharmacologySchoolofbasicmedicalscienceMay2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者日期：上年6月丨。日学位论文使用授权声

3、明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者；^十日期：如年6月丨。日儿茶素通过抑制ASICs对胃

4、癌细胞迁移和侵袭的影响研究生杜培培学号201212262841导师张艳教授郑州大学基础医学院药理学教研室河南郑州450002中文摘要目的:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率依然很高。在中国，大约三分之二的胃癌患者是到晚期才被诊断出来。由于它对化学治疗和放射治疗等一些常规的肿瘤治疗方法不敏感,所以目前仍主要通过手术方法来治疗胃癌,但是肿瘤细胞具有迁移和侵袭的特点,肿瘤的侵袭转移是影响预后的主要原因,它不但是术后复发之根本,甚至使部分患者失去了手术的可能,因此肿瘤的侵袭转移是其难以治愈的关键，但胃癌发生

5、转移的具体机制仍然不清楚。酸敏感离子+通道（Acid-sensingionchannels,ASICs）是细胞外由H调控的离子通道。研究表明在神经细胞中有ASICs的表达，也有研究表明在神经胶质瘤细胞和唾液腺癌细胞中也有ASICs的表达，神经胶质瘤的恶化程度与ASICs的表达呈正比，并且ASICs对肿瘤发生发展、侵袭转移产生影响，运用ASICs的阻断剂阿米洛利抑制了神经胶质瘤的迁移。儿茶素（Catechin，Cat）为一种纯植物提取物。研究表明，儿茶素具有较明显的抑制肿瘤发生和抗突变作用，可以通过抑制肿瘤血管

6、生成来抑制肿瘤细胞的侵袭转移，也可以通过下调Akt信号和钙黏素的表达抑制癌细胞的侵袭转移。令我们感兴趣的是胃癌细胞中有没有ASICs的表达，ASICs对胃癌细胞迁移和侵袭的影响，以及儿茶素会不会通过ASICs影响胃癌细胞的迁移和侵袭。鉴于此，本研究运用细胞免疫化学实验检测ASICs在胃癌中的表达，运用侵袭实验和划痕实验等方法初步探讨ASICs在胃癌细胞迁移和侵袭中的作用，运用全细胞膜片钳实验检测ASICs电流；通过加药前后分析儿茶素是否作用于新的靶点对胃癌迁移和侵袭产生影响。I方法：1培养胃癌SGC7901和

7、MGC803细胞。2设置空白对照组，儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l处理组，MTT比色法检测各组细胞的吸光度。探讨儿茶素对胃癌细胞SGC7901和MGC803生存率的影响。3设置空白对照组，儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l，阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组，采用免疫细胞化学技术，检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组中ASIC1的表达情况。4设置空白对照组，儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200

8、μmol/l，阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组，细胞划痕实验检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组的迁移能力。5设置空白对照组，儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l，阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组，细胞侵袭实验检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组的侵袭能力。6设置空白对照组、儿茶素400μmol/l、阿米洛利100μmol