ror2调控肿瘤细胞迁移能力的实验研究

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1、南京师范大学硕士学位论文Ror2调控肿瘤细胞迁移能力的实验研究姓名：涂晨申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：李朝军;温传俊20070526南京师范大学硕L学位论文中文摘要中文摘要Rot2调控肿瘤细胞迁移能力的实验研究在癌症引起的死亡病例中，大约有90％是由肿瘤脱离原发灶发生转移所引起的。因此理解肿瘤细胞向周围组织浸润性生长并向远处转移的过程，并对其采取有效的阻断措施，对于抗肿瘤治疗具有十分重要的意义。当今肿瘤治疗课题研究的目标之一就是揭示肿瘤细胞迁移的分子机理。受体酪氨酸激酶(RTKs)在动物发育的形态发生，尤其是骨骼形成中起着重要的作

2、用。它参与调节细胞增殖、分化、迁移、黏附以及死亡等多种细胞功能。Ror家族受体属于受体酪氨酸激酶中的孤儿受体一类，在进化上非常保守。在哺乳动物中Ror家族包含两种结构上相关的蛋白Rorl和Ror2，其中Ror2对神经系统以及四肢的发育都有着重要的作用。已有报道显示，Rot2可以通过结合Wnt5a、CKIe等因子，参与调节经典的和非经典的Wnt信号通路，但Rot2与肿瘤细胞迁移的相互关系并不清楚。我们前面的研究发现在小鼠低转移的黑色素瘤B16细胞内Ror2表达量很低，而在高转移的B16．BL6细胞中，Ror2存在特异性高表达。因此我们推测Ror2

3、可能是一种重要的调节因子，参与调控肿瘤细胞的迁移能力。本论文利用重组腺病毒表达载体研究Rot2基因过表达以及RNA干扰后在细胞水平和动物水平对于肿瘤细胞迁移能力的影响，并对其分子机制作了初步探索，结果如下：首先，利用细菌内同源重组法成功构建了能在真核细胞内高效表达Ror2基因的过表达腺病毒Ad．Ror2．Flag，以及能有效干扰Ror2基因表达的重组腺病毒AdHl．Ror2-RNAi，并用免疫印迹实验分别验证了重组腺病毒的功能。其次，体外的细胞划痕愈伤实验证实，利用重组腺病毒AdHl．Ror2．RNAi在B16．BL6细胞中干扰内源性高表达的R

4、or2基因，能抑制该细胞的迁移能力。尾静脉注射高转移的B16．BL6细胞至C57BL／6J小鼠体内的动物实验结果显示，重组腺病毒AdHl．Rot2．RNAi感染的B16．BL6细胞在小鼠的肺和肝脏等器官形南京师范大学顾十学位论文中j[摘要成的黑色素瘤转移瘤数目明显少于对照组，而皮下接种Ad}11．Ror2一RNAi感染的B16．BL6细胞对肿瘤的形成和生长并无显著影响。上述实验结果表明，通过RNA干扰的方式降低Ror2基因的表达后，能够显著地抑制高转移的黑色素瘤B16．BL6细胞在体外的迁移以及在C57BL／6J小鼠体内的转移。这些结果提示我们

5、，Ror2可能作为一个关键调控因子，参与调控肿瘤细胞的迁移能力。关键词；Ror2、肿瘤转移、细胞迁移、过表达、RNAi、SreII南京师范人学硕上学位论文AbstractExperimentalResearchofRot2RegulatingTumorCellMigrationApproximately90％ofallcancerpatientsdiefromthemetastaticspreadofprimarytllnlors．Anunderstandingoftheprocessbywhichcells丘omalocalizedtumor

6、invadeadjacenttissuesandmigratetodistantorgansiscrucialtoanticancerstrategies．Acen拓almminCanCertherapyistounderstandthemechanismoftumorcellmigration．Receptortyrosinekinases(RTKs)playcrucialrolesindevelopmentalmorphogenesisbyregulatingcellularproliferation,differantiation,mig

7、ration，anddeath．TheRor-familyreceptorsareorphanRTKs，whichareevolutionarilyconserved．TwostructurallyrelatedRorofamilyRTKsarefoundinmammals(RorlandRor2)．Ror2playsanimportantroleinthenervoussystemandacraldevelopment．PreviousstudiesshowedRor2CaninteractwimWnt5aandCKIe．regulating

8、canonicalornon-canonicalWntsignalingpathway．HowevertherelationshipbetweenRo