靶向沉默CXCR4基因抑制肝细胞癌侵袭体外研究.pdf

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1、中华肿瘤防治杂志2Ol3年1O月第2O卷第2O期CHINJCANCERPREVTREAT，October2013，Vo1．20No．20《实验研究／论著l靶向沉默CXCR4基因抑制tK-~ftt胞癌侵袭体外研究常远鸿李汀阴俊郭佳吴彦钊樊林。1．西安市第四医院消化内科·西安交通大学医学院附属广仁医院，陕西西安7100422．西安交通大学医学院第一附属医院普通外科，陕西西安710061【摘要】目的：采用RNAi技术构建CXCR4shRNA干扰栽体，探讨靶向沉默CXCR4基因表达后对人肝细胞癌增殖和侵袭作用的影响及可能机制。方法：通过蛋

2、白质印迹法和RT-PCR，检测不同分化程度的肝癌细胞株CXCR4表达程度。通过RNAi技术，将CXCR4shRNA干扰载体转染CXCR4高表达的肝癌细胞HepG2，并采用G418筛选出稳定表达株，蛋白质印迹法和RT-PCR验证shRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率。以转染空载体细胞为阴性对照组，MTT法检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的增殖能力，Transwell小室侵袭试验检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的侵袭能力，蛋白质印迹法检测MMP一2和MMP一9蛋白表达水平，免疫荧光检测MMP一2在细胞内表达。结果：CXCR4靶向沉默

3、的细胞CXCR4表达受到显著抑制。HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CXCR4一细胞CXCR4蛋白相对表达量分别为0．56±0．07、0．54±0．04和0．14±0．05，F一57．42，P<0．001。正常HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CXCR4一细胞的CxcR4mRNA相对表达量分别为1．04±0．05、1．05±0．11和0．19±0．03，P<0．001。MTT结果显示，CXCR4基因沉默能明显抑制HepG细胞的增殖。72h时正常HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CXC

4、R4细胞的相对增殖速度分别为1．34±0．05，1．32±0．03和1．14±0．03。Transwel1试验显示，1OFBS趋化作用下，HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CX—CR4一穿膜细胞数分别为85±13、89±17和23±6，差异有统计学意义，F一63．91，P<0．001；SDF-1趋化作用下，HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CXCR4一穿膜细胞数分别为168±20、171±24和3o±9。蛋白质印迹法显示，相对于正常HepG2细胞(0．83土0．04)，HepG2一CXCR4一细胞M

5、MP一2相对表达量(0．31±0．06)明显下降，P<0．001；而HepG2一Vec—tor细胞MMP一2相对表达量(0．85±0．07)改变不明显，P一0．75。HepG2、HepG2一Vector和HepG2一CXCR4一细胞MMP一9相对表达量分别为0．35±0．04、0．33±0．07和0．32±0．06，差异无统计学意义，F一0．23，P一0．79。结论：通过RNAi技术成功靶向干扰CXCR4基因表达，可抑制肝癌细胞增殖和侵袭，可能与其抑制侵袭相关分子MMP-2表达有关。【关键词】肝肿瘤；增殖；侵袭；CXCR4；RNA

6、干扰中华肿瘤防治杂志，2Ol3，20(20)：1569一l573InhibitioneffectofsilencingCXCR4ontheinvasionofhepatoce儿ularcarcinomacelllinesinvitroCHANGYuan—hong，LITing，ⅥNJun，GUOJia，WYan—zhao，FANLin1．DepartmentofGastroenterology，FourthHospitalofXi’an，GuangrenAffiliatedHospital，MedicalSchoolofXi’an

7、JiaotongUniversity，Xi’an710042，P．R．China2．DepartmentofGeneralSurgery，FirstAffiliatedHospital，MedicalCollegeXi’anJiaotongUniversityXi’an710061。P．R．China[ABSTRACT]OBJECTIVE：ToinvestigatetheeffectofCXCR4knockdownbyRNAinterferenceontheproliferationandinvasioninhepatocellu

8、larcarcinomacells．METHODS：TheCXCR4expressionlevelofdifferenthepatocel1ularcarcinomacelllineswasdetectedbywesternblottingatpr