microrna-301a靶向调节gax的表达促进肝细胞癌生长及侵袭转移的研究

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1、中图分类号UDCR65610学校代码密级10533博士学位论文‘microRNA．301a靶向调节GAX的表达促进肝细胞癌生长及侵袭转移的研究ThemechanismofmicroRNA-301ainpromatingtumorproliferation，invasionandmetastasisbytargetingGAXinhepatocellularcarcinoma作者学科研究学院(指导名：周鹏业：临床医学向：外科学(普通外科)、所)：湘雅医院师：王志明论文答辩日期丝丝!兰!互答辩委员会主席中南大学二。一

2、三年五月姓专方系教原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：堕堕日期：兰塑

3、_年三月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借

4、阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：堕盟导师签名：日期：业年上月丑日博士学位论文中文摘要microRNA．301a靶向调节GAX的表达促进肝细胞癌生长及侵袭转移的研究摘要研究背景：肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是一种常见的恶性肿瘤，在世界上HCC的死亡率在所有恶性肿瘤中位居第三位，每年有大约一百万人死于HCC。尽

5、管针对HCC的治疗包括手术、射频、肝移植、靶向治疗药物如索拉菲尼等多种治疗方法，‘但其复发、转移比例仍较高。如此高死亡率的HCC被认为是一个复杂的与多种基因有关的疾病。迄今为止，多条信号通路与众多的生长因子、癌基因和抑癌基因等的异常表达或激活参与了HCC的发生及发展过程。因此探索HCC的发病机制、寻找新的诊断标记物和治疗靶点是提高治疗效果的关键。MicroRNA(miRNA)是近些年来被发现的一类非编码单链小RNA分子，其参与了众多的生物学过程，例如生长、增殖、分化和凋亡等过程。miRNA通过与它们的靶向mRNA

6、的3’UTR区以不完全互补的方式结合，导致mRNA降解或抑制其翻译，通过这种机制miRNA降低了靶基因蛋白的表达水平。之前的研究已经证实miRNA的这种负性调节与多种人类肿瘤密切相关，比如乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌等。因此深入研究miRNA在人体肿瘤中的表达及其功能，对探索肿瘤的发病机制具有重要意义，并将II博士学位论文中文摘要有利于对肿瘤的诊断、治疗及预后的判断。生长终止特异性同源盒基因(GrowthArrest．specificHomeobox，GAX)又被称为MEOX2基因，是同源盒基因家族成员之一

7、，编码核转录因子并在血管平滑肌细胞(VSMCs)及血管内皮细胞(ECs)中表达。GAX曾被发现在多种肿瘤中过低表达，然而它与肝癌临床病理因素及预后的关系还知之甚少。～目的：检测miR．301a在肝癌组织中的表达的情况，探讨miR-301a在HCC发生发展及侵袭转移中的相关功能机制，分析miR．301a的靶基因GAX与肝癌临床病理因素及预后的关系。方法：。，1．收集2011年2月．2011年5月在中南大学湘雅医院手术切除并经病理确诊的25例HCC患者新鲜的肝癌及其癌旁组织，以及6例血管瘤患者新鲜的瘤旁肝组织作为正常

8、对照。采用实时荧光定量real．timePCR方法检测miR．301a在肝癌、癌旁及正常肝脏组织中的表达情况。同时用real．timePCR和westernblot方法检测GAX的表达情况。选取三个肝癌细胞系HepG2、Huh7、LM3及正常肝细胞系L02用real．timePCR方法检测miR．301a的表达差异。2．将hsa—miR-301ainhibitor使用脂质体Lipofectamine2000转染入HepG2细胞，同时设置阴性对照组和空白对照组。Real．timePCR检测转染后miR-301a表达

9、情况。同时用real．timePCR和westemblot方法检测下游靶点GAX的表达水平。MTT法检测细胞lTT博士学位论文中文摘要的增殖并绘制生长曲线；Transwell法检测细胞迁移和侵袭的能力；流式细胞术检测细胞的凋亡。3．运用生物信息学(miRbase，TargetScan，miRanda)的方法，预测GAX为其可能的下游靶点并用双荧光素酶报告基因系统验证。用G