bmp-4诱导上皮—间质转化促进肝细胞癌侵袭转移的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR363．2／R735．7610硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏BMP．4诱导上皮．间质转化促进肝细胞癌侵袭转移的研究AstudyontumorinvasionandmetastasispromotedbyBMP--4—-inducedepithelial-mesenchymaltransitioninhepatocellularcarcinoma作者学科研究学院(指导黄金霖基础医学病理学与病理生理学湘雅医院申兹教授答辩委员会主席—巴丛』二豸中南大学二零一四年五月名业向所师姓专方氛教万方数据学位论文原创性

2、声明Y111211611181151111151131111本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担～切相关责任。作者签名：蓝鱼：塞日期：2璺盟年』月丛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文

3、的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：耋垒：叠导师签名万方数据摘要BMP．4诱导上皮．间质转化促进肝细胞癌侵袭转移的研究背景：肝癌，尤其是肝细胞癌(HCC)，是全世界最常见的恶性肿瘤之一，也是肿瘤相关死亡率排名第三的恶性疾病。尽管有研究提示HCC是一种多步骤多阶段的致癌过程，其潜在的分子致病机制还不完全明确，很多关键性的问

4、题仍未解决。上皮间质转化(EMT)描述的是细胞逐渐失去典型的上皮细胞特征并获得间质细胞特性的生物学过程，也是启动肿瘤细胞发生细胞侵袭和远处转移的重要机制。骨形成蛋白(BMP)是转化生长因子TGF．p超家族的成员，在生长发育和肿瘤发生过程中发挥重要作用，且其下游信号通路与EMT的信号通路有交叉，且有研究表明在卵巢癌和胰腺癌细胞系中，BMP．4可诱导EMT的发生并使细胞转移能力增强。因此，本研究拟在人肝癌细胞系中，明确BMP．4对EMT的影响，并观察BMP．4对细胞生长、增殖、凋亡、侵袭与转移等方面的影响。材料和方法：本研究选用永生化肝细

5、胞系L02，及肝癌细胞中低侵袭转移力株HepG2与高侵袭转移力株HCCLM3，通过加入外源性重组人BMP-4蛋白和／或拮抗剂Noggin蛋白的影响，采用MTT增殖检测、平板集落形成试验、流式细胞术、Transwell小室试验等方法观察BMP．4蛋白对肝癌细胞系生长、增殖、细胞周期分布与凋亡、侵袭转移等特性的影响。通过普通PCR、实时荧光定量PCR及免疫万方数据荧光技术等检测上皮及间质细胞标志物的表达，以明确BMP．4对诱导肝癌细胞系发生EMT的影响。结果：BMP．4对L02细胞增殖及平板集落形成能力无显著影响，当浓度___50ng／m

6、L时可促进肝癌细胞系HepG2增殖。可刺激HepG2的平板集落形成能力(135．333±11．015V．S．46．667±11．719，P=0．001)。拮抗剂Noggin可显著减少HCCLM3细胞系集落形成数量(135．000+7．000V．S．45．000_+13．454，P=0．001)。BMP．4可增加肝癌细胞系S期的细胞比例减少凋亡，并能显著增加肝细胞系L02在G2／M期的细胞比例以抑制凋亡(12．567±O．998％V．S．8．067±2．078，P=0．028)。在BMP．4的作用下，L02和肝癌细胞系HepG2表达基质

7、金属蛋白酶舢．2及MMP一9的水平上调(前者分别为2．481±0．819V．S．0．795±O．215，2．817±0．763V．S．0．908±0．258，P值分别为O．026和O．015；后者分别为4．242___0．862V．S．0．644±0．236，3．716+1．334V．S．0．541±O．169，P值分别为O．002和O．015)，并促进细胞发生侵袭转移。当用终浓度为50ng／mL的外源性BMP-4蛋白作用肝癌细胞系约5天时间后，显微镜下可发现细胞发生形态学改变以及上皮细胞标志物表达下调、间质细胞标志物表达上调等特征，

8、提示BMP．4能诱导肝癌细胞系发生EMT。结论：本研究发现当BMP．4浓度>／50ng／mL时可促进HepG2细胞增殖，但改变BMP一4浓度对L02及HCCLM3细胞增殖无显著影响；BMP．4可促进划痕愈合，提高细胞迁移