肿瘤相关成纤维细胞中thy-1激活诱导上皮间质转化促进胃癌细胞侵袭转移的研究

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1、上海交通大学医学院博士学位论文论文题目：肿瘤相关成纤维细胞中Thy．1激活诱导上皮间质转化促进胃癌细胞侵袭转移的研究作者姓名胡伟国学生学号指导教师朱正纲教授指导小组郑民华教授刘炳亚教授吴云林教授学科专业：外科学(普通外科)申请学位：外科学博士研究方向：胃肠道肿瘤培养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院答辩日期：2014年10月万方数据JJ嘲嬲掣Y281d鞘掣ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicineDoctoralDissertationTHESTUDYOFCANCER．ASSOCIATEDFIBROBLASTPROMOTESTU

2、MORINVASIoNANDMETASTASISBYINDUCINGEPITHELIAL—MESENCHYMALTRANSITIONVIAACTIVATINGTHY．-1INHUMANGASTRICCANCERAuthorWei—guoHUStudent’SIDT201100024SupervisorProf．Zheng—gangZHUCo-supervisorsProf．Min．huaZHENGPrOf．Bin-yaLIUProf．Yun—linWUMajorSurgery(GeneralSurgery)ResearchFieldGastrointestinaICanc

3、erDegreePh．DDebateDateOct。2014A咖iationRuijinHospital，ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。贰蒜两学位论文作者签名：日期：2014年10月18日万方数据上海交通大学学

4、位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密√(请在以上方框内打“4”)赢萨翻学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2014年10月18日日期：2014年10月日万方数据肿瘤相关成纤维细胞中Thy．1激活诱导上皮间质转化促进胃癌细胞侵袭转移的研究摘要【目的】研究肿瘤相关成纤维细

5、胞(CAFs)促进胃癌细胞上皮间质转化(Em)的作用，并探讨其机制。【方法】分离、纯化、鉴定人胃癌，将CAFs和配对的正常成纤维细胞(NFs)分别与胃癌细胞系MKN28进行共培养，研究胃癌细胞的迁移侵袭能力和胃癌细胞是否发生EMT的变化；研究54例胃癌病人的组织芯片和5例原代分离培养的胃癌CAFs中胸腺细胞分化抗原．1(Thy．1)表达；进一步通过shRNA技术在CAFs中将Thy．1表达进行基因沉默后再与MKN28进行共培养，以证实胃癌相关成纤维细胞是否通过Thy-1介导胃癌细胞发生EMT。【结果】成功分离、纯化并鉴定了人胃癌相关成纤维细胞，分离出的胃癌相关成纤维细胞呈

6、现纺锤形的形态，与NFs形态无显著差异。应用a．SMAmRNA的表达对分离出的原代细胞进行鉴定，发现在CAFs中01．SMAmRNA的表达都比配对的NFs中显著增加，提示从胃癌组织中分离出的成纤维细胞即为胃癌相关成纤维细胞，可以作为细胞模型进行后续实验研究。当CAFs和配对的NFs分别与胃癌细胞系MKN28进行共培养后，胃癌细胞的迁移侵袭能力显著增强，胃癌细胞中E．cadherin表达显著减低，Vimentin、Snail、Slug及MMP一9表达显著增高，表明胃癌细胞发生了EMT。通过54例胃癌病人的组织芯片以及分离的胃癌相关成纤维细胞中的免疫组化研究发现，胃癌基质比非

7、癌组织基质中Thy-1表达量显著增强，阳性细胞形态上呈现为梭形，主要位于癌巢周围，而胃癌组织基质主要细胞成分为CAFs，Thy-1主要在CAFs中出现高表达。在分离出的5例胃癌相关成纤维细胞中，通过检测Thy-lmRNA及蛋白表达后发现，4／5例样本的CAFs中Thy一1的表达较配对NFs中显著增加，进一步证实了在胃癌相关成纤维细胞中Thy-1存在异常的过度表达。通过shRNA技术在CAFs中将Thvl表达进行基万方数据因沉默后再与MKN28进行共培养，结果发现胃癌细胞的EMT效应发生了减弱，并且其迁移侵袭能力也发生了减弱，E