sin1通过调控上皮细胞间质转化促进肝细胞癌侵袭转移

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1、万方数据中图分类号UDCR735．7610博士学位论文学校代码密级10533SIN1通过调控上皮细胞间质转化促进肝细胞癌侵袭转移SINlpromotesinvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinomabyfacilitatingEpithelial—MesenchymalTransition作者学科研究学院(指导名：徐江锋业：临床医学向：外科学(普通外科)所)：湘雅医院师：杨连粤教授答辩委员会主席丝中南大学二O一三年五月姓专方氛教万方数据原创性声明本人声明，所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存

3、学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签名獬期：上韭』月上日万方数据本课题受以下基金项目资助1．国家自然科学基金面上项目(30571826)2．国家自然科学基金面上项目(81172018)3．卫生部临床学科重点项目(2010．2013)4．国家科技重大专项(2012ZXl0002012．011)II万方数据博士学位论文中文摘要SINl通过调控上皮细胞间质转化促进肝细胞癌侵袭转移摘要原发性肝细胞癌(hepatocell

4、ularcarcinoma，HCC)是世界上最为常见的恶性肿瘤之一。其发病率居男性恶性肿瘤的第五位，死亡率居男性恶性肿瘤第二位。全球每年新发病例约748300人，年死亡病例达695900人。随着肝脏外科技术的进步，肝癌的手术治疗水平已有显著提高，但其术后5年复发转移率仍高达70％，严重制约了肝癌患者整体治疗水平的提高。因此，深入研究肝癌复发转移的机制，探索有效的预防和治疗复发转移的手段是当今肝癌研究的热点，对于进一步提高肝癌患者整体治疗水平具有十分重要的意义。应激活化蛋白激酶作用蛋白1(SAPKinteract

5、ingprotein1，SINl)新近发现的胚胎发育关键蛋白。SINl被认定为TORC2关键组成成分，可通过调控AKT磷酸化影响AKT下游信号通路。众所周知，AKT信号通路对包括肝癌在内的恶性肿瘤的侵袭转移发挥着重要的作用，尤其是近年来大量研究发现AKT信号通路可以调控上皮细胞间质转化，从而促进肿瘤转移。这些均提示SINl很可能在肝癌的侵袭转移中发挥重要作用。为此，本课题试图研究SINl在肝癌组织样本及肝癌细胞系中表达水平，并结合随访资料，分析SINl与肝癌临床病例特征的关联以及SINl与肝癌患者生存预后的关系

6、。我们利用siRNA干扰技术在肝癌细胞系中抑制SINI的表达，从体外和体内研究SINl对肝癌侵袭转移的作用，并探讨-了SINI对肝癌上皮细胞间质转化的调控作用。以Ill万方数据博士学位论文中文摘要期阐明SINl在肝癌侵袭转移中的作用及其作用机制。我们的研究结果表明：1．SINlmRNA和蛋白在肝癌组织和肝癌细胞系中显著高表达首先我们通过实时定量PCR检测了30对肝癌组织以及相应癌旁组织中SINlmRNA的表达水平，结果显示SINlmRNA在肝癌组织中显著高表达(中位值为2．2倍)。通过westernblot检测

7、SINl蛋白在肝癌组织以及相应癌旁组织中的表达，结果表明SINl蛋白在肝癌组织中的表达水平显著高于邻近非癌肝组织(只0．05)。通过进一步分层分析我们发现，SINl在孤立性大肝癌(SLHCC)中的表达水平显著低于结节性肝癌(NHCC)(P=-0．016)，而与小肝癌(SHCC)之间则没有显著差别(乃O．05)。我们进一步采用real-timePCR和westernblot检测了SINlmRNA及蛋白在正常肝细胞系L02，以及五种不同的肝癌细胞系HepG2、EqCC97一L、MHCC97一H、HCCLM3和SId

8、MC一7721中的表达水平。实验结果显示：SINl在肝癌细胞系中的表达水平显著高于正常肝细胞系L02(尺0．05)，且SINl在肝癌细胞系中的表达水平随着各肝癌细胞系侵袭转移潜能的增强而增高，提示SINl与肝癌的侵袭转移密切相关。同时，我们还选取了SINl表达水平最高的HCCLM3和MHCC97-H细胞系作为下一步的研究对象。2．SINl表达水平与肝癌临床病理特征及预后的关系通过免疫组