食管癌相关基因2抑制细胞侵袭迁移的机制研究.pdf

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1、中国药物与l临床2015年3月第15卷第3期ChineseRemedies＆Clinics，March2015，Vo1．15，No．3食管癌相关基因2抑制细胞侵袭迁移的机制研究原发家毕炀辉杜斌王文健聂守民李彦红赵瑞君刘静【摘要】目的本研究旨在明确食管癌相关基因(ECRG)2基因抑制肿瘤细胞侵袭迁移的分子机制。方法利用HT1080．Tet—On可诱导表达系统，采用基因敲除技术、免疫共沉淀、体外Matrigeltranswell实验等技术，深入研究ECRG2基因抑制肿瘤细胞侵袭迁移的分子机制。结果①敲除HT1080．ECRG2．Tet—On可诱导表达细胞株中的ECRG2后，加

2、入多西环素诱导ECRG2蛋白高度表达，撤除多西环素后ECRG2蛋白表达降低；②HT1080．ECRG2一Tet—On一3UTR—si可诱导细胞株中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)分解尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)产生分解后的uPAR(D2D3)：而加入多西环素诱导ECRG2表达后，ECRG2通过与uPA／uPAR直接结合．抑制uPA对uPAR的分解作用：@HT1080一ECRG2一Tet—On。3UTR—si可诱导细胞株中uPAR／甲酰肽样受体(FPRL1)的结合作用显著增强，而添加多西环素诱导ECRG2表达细胞中uPAR／FPRL1的结合作用被完全阻断，撤除多西

3、环素后结合作用又恢复；④敲除HT1080．ECRG2一Tet—On3UTR—si可诱导细胞株中FPRL1，细胞的侵袭迁移能力降低。结论ECRG2通过uPMuPARfFPRL1通路抑制肿瘤细胞侵袭迁移。【关键词】肿瘤浸润；癌基因；ECRG2；uPAR；FPRL1MechanismunderlyingtheECRG2inhibitionofceHinvasionandmigrationYuanFajia*，BYanghui，DuBin,WangWeion,MeShoumin，LiYanhong,ZhaoRu~un，Liuring．*DepartmentofParasitolo

4、gy,SchoolofBasicMedicolSciences．ShanxiMedic01Unwe~ity．T~yuan03o001．China【Abstract】0bjectiveTodeterminethemolecularmechanismsunderlyingtheinhibitoryactionofECRG2againsttumorcellinvasionandmigration．MethodsHT1080一Tet—Oninducibleexpressionsystem．geneknockouttechniques．CO—immunoprecipitation．

5、andmatrigeltranswellinvitrowereusedtoexplorethetumorresistanceofgeneECRG2．Results(WhenECRG2wasknockedoutfromcelllineHT1080一ECRG2一Tet—On，addingdoxcyclinmayresultinhighexpressionofECRG2protein，buttheexpressionwasreducedafterremovingdoxcyclin．②uPAcoulddecomposeUPARtogeneratecleavedUPARrD2D31

6、intheHT1080一ECRG2一Tet．On3UTR．Siinduciblecellline；whereasthehighlyexpressedECRG2inducedbydoxcyclincouldinhibituPAdecomposingUPARbybindingtoUPA／uPARdirectly．@ThebindingofuPAR／FPRL1inHT1080一ECRG2一Tet．On一3UTR，Sicelllinescouldbesignificant—lYenhanced；andthehighlyexpressedECRG2inducedbydoxcycli

7、ncouldblockthebindingabilitybetweenuPARandFPRL1．whereasthebindingabilitycouldresumebyremovingdoxcyclin．(4)WhenFPRL1wasknockedoutfromHT1080一ECRG2一Tet．On一3UTR—si—induciblecellline．areductionincellinvasionandmigrationwasnoted．Con．clusionECRG2couldinhibittumorcellinvasi