sirna抑制cortactin基因表达对喉癌hep-2细胞增殖和侵袭的影响

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文siRNA抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的影响研究生姓名：谭桂煌指导教师姓名、职称：谢海龙副教授甘润良教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：肿瘤发病机制及防治2013年4月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的

2、同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文

3、。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日目录一、中文摘要……………………………………………………………1二、英文摘要……………………………………………………………2三、正文1.前言…………………………………………………………42.实验材料………………

4、…………………………………………63.技术路线…………………………………………………………94.实验方法………………………………………………………105.实验结果………………………………………………………196.讨论………………………………………………………267.结论………………………………………………………30四、参考文献…………………………………………………………31五、附录…………………………………………………………34六、文献综述…………………………………………………………35七、硕士期间撰写的文章

5、……………………………………………47八、致谢………………………………………………………………48siRNA抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的影响硕士研究生：谭桂煌指导教师：谢海龙副教授甘润良教授中文摘要背景与目的：皮层肌动蛋白结合蛋白cortactin(corticalactin-bindingprotein)参与细胞骨架系统的调控、细胞外信号转导以及细胞黏附等过程，研究表明cortactin与肿瘤的侵袭和转移有关。然而，cortactin在喉癌中的重要作用还没有被详细的阐明。本

6、实验探讨siRNA(smallinterferingRNA)抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞系体外增殖和侵袭的影响。方法：利用基因重组技术构建针对cortactin基因的小干扰RNA真核表达载体pSilencer3.1-H1neo-cortactin；用DNA测序法鉴定重组质粒；用脂质体转染技术将重组质粒转染Hep-2细胞，同时以转空载体组和空白组作为对照(三组细胞分别命名为pcortactin-siRNA/Hep-2，pSilencer3.1/Hep-2，Hep-2)，G418筛选出阳性细

7、胞克隆；应用Westernblot及免疫细胞化学方法分别检测cortactin在Hep-2中的siRNA干扰效率及定位；MTT和平皿克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布情况；Transwell体外迁移、侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力。结果：DNA测序分析表明针对cortactin基因的重组真核表达载体pSilencer3.1-H1neo-cortactin构建成功。免疫细胞化学方法显示cortactin在Hep-2细胞胞浆中呈弥漫性表达，Westernblot显示成功构建cortactin表

8、达下调的稳转喉癌细胞系pcortactin-siRNA/Hep-2。与空白组Hep-2细胞比较,pcortactin-siRNA/Hep-2的cortactin含量为11.22%(P＜0.01)；细胞生长速度明显减慢（P＜0.05）；克隆形成率降低为21.47%(P＜0.01)；细胞中S期细胞百分比明显降低（P＜0.05）；迁移、侵袭能力显著降低(P＜0.01)。结论：1.成功建立cortactin