sirna下调aeg1基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭影响

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一部分AEG．1siRNA干扰序列的筛选及效果验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17第二部分AEG．1表达下调对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡

2、及侵袭的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26参考丈献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一28附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．47万方数据温州医科大学硕士学位论文中文摘要墨i趔△至迥堑鱼二!基国壹达怼韭丛!细胞韪疸细胞增殖!烫圭塑堡耋的量堕第一部分：AEG一1SiRNA干扰序列的筛选及效果验证目的：设计合成针对人AEG—l基因的三对siRNA序列，验证并从中筛选出对非小细胞肺癌细胞基因沉默效果最优的序列。方法：(1)根据RNA干扰原理，针对人AE6—1基因设计并化学合成三对AEG-IsiRNA序列、一对阴性序列和一对带荧光标记的阴性序列(FAM-siRNA)。(2)用脂质体转染试剂lipofetamin2000介导标记的阴性对

4、照序列(F斛siRNA)转染非小细胞肺癌细胞，转染6小时后，通过荧光显微镜和流式细胞检测技术评价转染效率，进行转染条件的优化。(3)筛选实验分为空白对照组、转染试剂对照组(MOCK组)、阴性对照组以及三个siRNA干扰实验组，转染48小时后。通过荧光定量PCR和Westernblot分别观察转染前后非小细胞肺癌A549细胞中AEG-ImRNA和相应蛋白表达的下调情况。从中选出一对最有效的AEG-IsiRNA序列。结果：荧光定量PCR检测mRNA及Westernblot检测蛋白表达结果显示，转染48小时后，三对siENA均能显著下调非小细肺癌细胞细胞AEG-I基因的mRNA转录和蛋白表达水

5、平，其mRNA表达抑制率分别为69．8％、69．6％和41．4％。三个序列中AEG-IsiRNAI的沉默效果最优。结论：成功设计和合成了针对AEG-I基因的小干扰RNA序列，且AEG—lsiRNAI转染细胞后，其mRNA和蛋白表达抑制效果较优，为进一步实验奠定了基础。关键词：AEG一1；siRNA；非小细胞肺癌；RNA干扰第二部分：AEG-I表达下调对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响目的：采用脂质体转染法介导siRNA靶向沉默非小细胞肺癌细胞AEG-I基因表达，探讨其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：实验分为转染试剂对照(MOCK)组、阴性对照(controlsiRNA)组

6、及AE6—1siRNAI干扰实验组。用脂质体1ipofetamin2000转染试剂介导AEG—lsiRNA]转染非小细胞肺癌细胞，靶向沉默非小细胞肺癌细胞的AEG一1基因后，用CCK一8细胞增殖实验测定转染一定时万方数据温州医科大学硕士学位论文间后的细胞增殖情况，运用流式细胞检测技术分析转染48tJ、时后的细胞凋亡情况，同时采用Transwell小室来观察靶向沉默AEG—l基因后，肿瘤细胞的迁移和侵袭能力的变化。结果：转染48小时后，非小细胞肺癌细胞在siRNA干扰实验组中的细胞增殖率较阴性对照组显著下降26．3％，而MOCK组与阴性对照组相比无明显差异。同时，流式细胞检测技术分析结果显

7、示靶向沉默AEG—l表达后，非小细胞肺癌细胞凋亡率升高，而Transwell小室迁移和侵袭结果也表明，转染24tJ＼时后，细胞迁移及侵袭能力分别抑常IJ49．3％和54．8％。结论：下调AEG一1基因表达可明显抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡，且AEG一1与细胞的迁移和侵袭能力密切相关。关键词：AEG-I：非小细胞肺癌；增殖；凋亡；迁移：侵袭2万方数据温州医科大学硕士学位论文AbstractDownregulationofA