顺铂对 siRNA 抑制 ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第19期顺铂对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响宋莹。仇秦威，贺智敏，谷依学(广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所，广州510095)摘要：目的观察顺铂(eDDP)对小分子干扰RNA(siRNA)抑制切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响，并探讨cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性。方法根据ER—CC1基因序列，设计合成3对特异性的siRNA(分别命名为s1、s2、s3)，同时合成阴

2、性对照siRNA(命名NC)。取对数生长期的A549细胞，采用Lip0fectarnine脂质体转染法进行s1、s2、s3、s1+s2+s3及Nc转染，rea1．timeRT．PCR和Westernblotting技术检测ERCC1mRNA和蛋白表达。结果与NC相比，s1、s2、s3及s1+s2+s3均能下调ERCC1表达，但s1+s2+s3下降最显著。用NC及S1+s2+s3转染A549细胞，24h后加入0,0．5⋯124、8g／mL的cDDP，采用MTS法计算细胞生存率及cDDP对细胞的半数

3、抑制浓度(IC。)。A549细胞转染后48h加4S／mL的eDDP，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果加入0、0．5⋯124、8Ixg／mL的cDDP，NC转染的A549细胞存活率分别为100．00％±3．21％、94．86％士7．14％、89．79％4-3．29％、66．67％4-5．40％、33．31％±1．79％、19．12％±0．41％，S1+s2+s3转染的A549细胞存活率分别为100．00％±6．53％、71．63％±8．23％、59．33％±0．94％、37．42％±1．57％、19

4、．41％±1．41％、12．75％±0．27％，相同eDDP浓度下A549细胞存活率比较，P均<0．05；S1+s2+s3、NC转染细胞的Ic50分别为(1．25±0．11)、(3．09±0．36)g／mL，二者比较，P<0．01。未加cDDP时，NC与s1+s2+s3转染A549细胞凋亡率分别为8．06％-4-1．79％、14．96％+-0．47％，加入eDDP后，细胞凋亡率分别为24．61％-4-1．98％、43．90％±3．01％，二者比较，P均<0．05。结论cDDP能降低siRNA抑制

5、ERCC1基因表达的A549细胞增殖能力，并诱导细胞凋亡；eDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性升高。关键词：切除修复交叉互补基因1；RNA干扰；顺铂；肺肿瘤；肺癌doi：10．3969／j。issn．1002-266X．2014．19．002中图分类号：R734．2文献标志码：A文章编号：1002-266X(2014)19-0004-04EfectsofsiRNAsilencingERCC1geneexpressionandcisplatinonproliferat

6、ionandapoptosisofIungcancerA549cellssoNGYg。QIUQin—wei，HEzhi—min，GUYi—x,ll,e(CancerResearchCenter，AffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedwalUniversity，Guangzhou5l0095，China)Abstract：0bjectiveToinvestigatetheeffectsofsmallinterferingRNA(siRNA)down-regul

7、atingtheexcisionre—pairCROSSeomplementationgroup1(ERCC1)expressionandeisplatin(cDDP)ontheproliferationandapoptosisoflungcancerA549cellline．Furthermore，tostudythechemotherapysensitivityofA549cellswithdown-regulationofERCC1toeisplatin．MethodsThenegativ

8、econtrolsiRNA(NC)togetherwiththreepairsofsiRNAs(S1，s2ands3)targetingERCC1geneweredesignedandsynthesized．ThesiRNAs(S1，S2，S3，S1+s2+S3andNC)weretransfeetedintoA549ceilswithlipofectamine2000，respectively．ThemRNAandproteinexpressionlevelsofERCC1wereevalua