sirna沉默tgf-β1基因表达对肺癌顺铂耐药细胞的影响

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1、SiRNA沉默TGF-131基因表达对肺癌顺铂耐药细胞的影响摘要目的：国内外研究及本课题前期实验均证实肿瘤耐药性的产生与卜皮问质转化(epithelialtomesenchyma]transition，EMT)之问具有相关性。本实验以EMT主要调控因子～转化生长因子一Dl(TGF一131)为切入点，探讨TGF—Dl小干扰RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)对A549顺铂耐药细胞(A549／BBP)耐药性的影响，进一步了解肺癌细胞顺铂耐药性的发生机制，并从EMT的角度寻找耐药性肿瘤治疗的新思路。方法：

2、设计TGF一13lsiRNA基因片段，利用脂质体转染A549／DDP细胞，采用RT～PCR、免疫细胞化学观察转染前后A549／DDP细胞EMT表型标记物E—cadherin、vimentin以及耐药蛋白ERCCImRNA及蛋白表达情况，CCK一8法检测各组细胞再次添加顺铂后增殖活性变化及化疗药物的敏感性变化。结果：1．与A549细胞相比，A549／DDP细胞呈长梭形、排列呈旋涡状或放射状，类似纤维细胞；免疫细胞化学显示细胞的上皮标志物E--cadherin表达下调，问质标志物vimentin表达上调，这些都与’EMT发生时

3、的典型特征相符合。2．TGF一01SiRNA转染后，RT—PCR及免疫细胞化学均观察到A549／DDP细胞E-cadherin表达增强，vimentil3表达下调，并且耐药因子ERCClmRNA及蛋白表达下调。3．CCK一8法检测各组细胞耐药指数及再次添加顺铂后的生长活性变化，结果显示A549／DDP细胞耐药指数2．77，而A549／A549／DDP转染组细胞耐药指数1．28，两组具有显著差异性(P=O．∞O)；且&549／BBP转染组与A549／99P细胞相比，在添加顺铂24h、48h及72h后抑制率均明显升高(P=O．

4、000)，而转染阴性对照组未见明显差异(P>0．5)。结论：1．A549／DDP细胞在获得耐药性的同时呈现EMT，TGF—BlsiRNA转染后，A549／DDP细胞上皮细胞表型表达增强，且耐药因子ERCClmRNA及蛋白表达下调，显示靶向TGF～Bl表达可以逆转耐药细胞的EMT改变。2．CCK一8实验检测各组细胞再次添加顺铂后的生长抑制率，证实抑制TGF—p1表达后，A549／DDP明显恢复了对顺铂的敏感性，提示逆转A549／DDP细胞EMT可有增强其对顺铂的敏感性，进一步验证了TGF—pl介导的EMT与肿瘤化疗耐药性产生

5、之问的相关性。硕士研究生：陈云庆(病理学)指导教师：项锋钢教授f{llllllll{llll[[1llll[[1lllllllleEIIIIleEIllllCY2589501关键词：非小细胞肺癌；化疗耐药；转化生长因子．131；上皮间质转化EffectofsilencingTGF一131withsmallinterferingRNAoncisplatinobjectiveresistanceoflungcancercellsAbstractThecorrelationbetweenepithelial—mesenchyma

6、ltransition(EMT)andchemoresistanceinnon—smallcelllungcancer(NSCLC)hasbeenconfirmedbyourpreviousexperimentsandsomeotherreseach．ThisexperimenttookthemainregulatorofEMT—transforminggrowthfactor一61(TGF—S1)，asthestartingpointtoexploretheeffectofsmallinterferingRNA(siRN

7、A)onchemoresistanceofA549／DDPcells，andtofurtherinvestigatedthemechanismsofcisplatin—resistance，．MethodsThemRNAandproteinexpressionofE—cadheirn、vimentinandERCC1wereinvestigatedbyRT—PCRandimmunocytochemistryofA549／DDPcellstransfectedwithTGF—B1siRNA．Themortalityandse

8、nsitivitytocisplatinofcellswasobservedbycck一8assayindifferentgroupretreatedwithcisplatin．Results1．WeobservedthatA549／DDPassumedaspindleshape，andarranged