沉默ercc1基因对卵巢癌细胞a2780顺铂耐药性的影响

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1、沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞A2780顺铂耐药性的影响：孙业红，陈富强，朱莹，李体远【摘要】目的：研究RNA干扰切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达后，卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的变化。方法：A2780细胞分别转染ERCC1基因的siRNA和GFPsiRNA，并给予顺铂(使其终浓度达到3μmol/L)，蛋白质印迹法分别检测顺铂给药前后ERCC1蛋白的表达，并用MTT法检测顺铂不同浓度下A2780细胞的存活率。结果：①转染ERCC1siRNA后，实验组蛋白质表达量较对照组显著降低;②ERCC1siRNA+顺铂组的ERCC1蛋白表达要弱于ERCC1siRNA+PBS组，而GFPs

2、iRNA+顺铂组的蛋白表达要弱于GFPsiRNA+PBS组;③顺铂(浓度在0.75～12μmol/L之间)呈浓度依赖性地降低A2780细胞的存活率;④在相同浓度顺铂的作用下，与GFPsiRNA组相比，ERCC1siRNA组的顺铂量效曲线左移。结论：顺铂能抑制沉默ERCC1基因后A2780细胞的生长，且在一定浓度范围内呈浓度依赖性;ERCC1是参与顺铂耐药性产生的重要因素之一。【关键词】RNA干扰;切除修复交叉互补基因1;顺铂;耐药性;卵巢癌　　[Abstract]Objective:ToinvestigatetheinfluenceofRNAinterferingtheexpression

3、ofexcisionrepaircrossplementing1(ERCC1)geneonthesensitivityofovariancancercellA2780toCisplatin.Methods：SiRNAandGFPsiRNAakeacontrolmannerrespectively.Cisplatin(finalconcentrationof3μmol/L)(MTT)colorimetricassayinethelivabilityofthecancercellsindifferentCisplatinconcentration.Results：①Aftertransfec

4、tionofERCC1siRNA,Theresultsshoentalgroup;②ERCC1siRNA+CisplatingroupandGFPsiRNA+CisplatingroupexpressedlessERCC1proteinthanERCC1siRNA+PBSgroupandGFPsiRNA+PBSgrouprespectively;③Cisplatin(attheconcentrationof0.75～12μmol/L)inhibitedthelivabilityofA2780cellsinadosedependentmannerindespiteofsiRNA;④Atas

5、ameconcentrationofCisplatin,thedoseeffectcurveofknockoutgroupannerindespiteofsiRNA;ERCC1isoneoftheimportantreasonsofCisplatinresistanceinA2780cell.　　[Keyenting1gene;Cisplatinresistance;ovariancancer　　顺铂[cisDiamminedichloroplatinum(Ⅱ)，Cisplatin，CDDP]是卵巢癌等癌症治疗中使用最为广泛的化疗药物之一。顺铂通过使肿瘤细胞形成DNA加合物，造成肿瘤细

6、胞的DNA损伤，继而使肿瘤细胞DNA的复制被抑制，细胞分裂再生停止，最终杀灭肿瘤细胞。然而，顺铂的疗效会因癌细胞内在或者后天(药物诱导)获得的耐药性而减弱。到目前为止，对顺铂的体内耐药机制并不完全清楚，但是其中核苷酸切除修复(nucleotideexcisionrepair，NER)途径对铂类药物形成的DNA加合物的切割修复在肿瘤对铂类药物的耐药过程中起着非常重要的作用[1]。　　NER修复路径有多种因子参与，切除修复交叉互补蛋白1(excisionrepaircrossplementingprotein1，ERCC1)在其中起着决定性作用[2-4]。ERCC1对DNA损伤的识别功能、ER

7、CC1的酶切割活力对肿瘤细胞的DNA损伤修复能力和铂类药物耐药都具有重要影响[5]。本研究应用RNA干扰(siRNA)技术沉默ERCC1基因，探讨在顺铂作用下，卵巢癌细胞株A2780ERCC1基因表达的变化，以建立一个ERCC1缺损细胞模型，为进一步研究ERCC1在肿瘤耐药中的作用机制奠定基础;同时探讨沉默ERCC1基因后，顺铂对卵巢癌细胞株A2780细胞的损伤作用。　　1材料与方法　　1.1材料　　人卵巢癌细胞株A27