sirna沉默annexin1基因对膀胱癌t24细胞顺铂耐药的影响

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1、siRNA沉默Annexin1基因对膀胱癌T24细胞顺铂耐药的影响作者：高琳杨远航徐万海林相国李建章杨德君王晓民【摘要】　　目的观察RNA干扰沉默膜联蛋白1(Annexin1)基因表达技术对膀胱癌T24细胞Annexin1基因表达和顺铂耐药的影响。方法针对Annexin1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小分子干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞，转染后应用半定量RTPCR和Western印迹检测Annexin1mRNA和蛋白的改变，用MTT法检测沉默Annexin1表达在

2、膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染siRNA后膀胱癌T24细胞Annexin1的mRNA和蛋白水平显著下降(P＜0.05），增强细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05）。结论RNA干扰Annexin1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降，并且增强T24细胞对顺铂的敏感性。【关键词】膀胱癌；膜联蛋白1；siRNA；顺铂【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofannexin1genesilencingbysmallinterferingRNA(siRNA)onbladder

3、cancercellsT24andthesensitivitychangeofDDP.MethodsThreesiRNAtargetingthreedifferentdomainsofannexin1geneweredesigned,synthesized,andtransfectedintobladdercancerT2413cellsbylipofectamineTM2000.Aftertransfection,expressionofannexin1wasdetectedbyRTPCRandWestblo

4、tting.ThecellularsensitivitytoDDPwasevaluatedbyMTTassay.ResultsComparedwiththenegativecontrol(siRNANC)groups,transfectionofthreetargetingsiRNAinT24cellsdecreasedtheexpressionofannexin1mRNAandprotein.Annexin1genesilencingincreasedthesensitivityofT24cellstoDDP.

5、ConclusionsThechemicallysynthesizedspecificsiRNAtargetingannexin1couldeffectivelyreducetheexpressionofannexin1gene,increasethesensitivityofT24cellstoDDP.【Keywords】Bladdercancer;Annexin1;siRNA;DDP　　膜联蛋白1(Annexin1)是上皮生长因子（EGFR）激酶的主要底酶，糖皮质激素刺激其产生和活性。Annexin1增

6、强感染局部的凋亡表明它对肿瘤的诊断和治疗有重要意义，因此提出该蛋白质与肿瘤细胞的活性调节相关〔1，2〕。Annexin1与膀胱癌发生、发展密切相关。本研究针对Annexin1基因mRNA序列设计合成与之互补的双链小分子干扰RNA（siRNA），在脂质体介导下转染膀胱癌T24细胞系，观察对Annexin1基因mRNA和蛋白表达及对顺铂敏感性的变化。　　1材料与方法13　　1.1材料　　1.1.1细胞株　　膀胱癌T24细胞株。　　1.1.2主要试剂　　RNA干扰试剂盒(SilencerTMsiRNAConstruct

7、ionKit)购自美国Ambion公司。阳离子脂质体转染试剂盒LipofectamineTM2000、Trizol、MMLV购自Invitrogen生命技术公司。RPMI1640、IMDM、胰蛋白酶购自Gibco公司。　　1.2方法　　1.2.1siRNA的设计及合成　　根据基因库中Annexin1基因序列（GenBankAccessionNo.NM000700）和siRNA设计原则，应用Ambion生物公司的设计软件(siRNATargetFinderandDesignTools），自Annexin1mRNA的

8、起始密码子开始，寻找“AA”二连序列，记下其3′13端的19个碱基序列作为候选的siRNA靶序列。将候选序列在基因库中用Blast软件进行同源序列搜索，排除那些和其他基因编码序列或基因表达序列标签(EST)同源的候选序列。最终选择了3段21个碱基的siRNA序列（TⅠ、TⅡ、TⅢ），分别靶向Annexin1基因的240260(