雷帕霉素抑制胰腺癌细胞增殖的体外实验研究

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1、温州医学院硕士学位论文雷帕霉素抑制胰腺癌细胞增殖的体外实验研究姓名：钱琼信申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：周蒙滔2012-05-24温少1'1医学院硕士学位论文雷帕霉素抑制胰腺癌细胞增殖体外实验研究中文摘要目的：通过实验以不同浓度雷帕霉素作用于人胰腺癌Panc．1细胞，研究用药前后胰腺癌细胞增殖的变化，用药前后人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)的mRNA以及与胰腺癌细胞信号通路相关的miRNA分子的表达变化，并分析胰腺癌细胞增殖与hTERTmRNA表达，显著变化的miRNA分子之间的关系，借此讨论雷帕

2、霉素在抑制胰腺癌Panc一1细胞增殖机制中的作用。方法：通过倒置显微镜观察雷帕霉素作用Panc．1细胞后的形态学改变：CCK一8比色法检测雷帕霉素对Panc．1细胞增殖的抑制率；realtime．PCR测定雷帕霉素对Panc一1细胞hTERTmRNA的表达量变化：realtime．PCR测定雷帕霉素对Panc．1细胞相关miRNA分子的表达变化。结果：(1)倒置显微镜观察发现对照组正常胰腺癌Pane．1细胞生长良好，呈单层贴壁生长，细胞形态基本为不规则多角形，并有大量细胞伪足伸出、互相交联、融合成片，胞膜表面光滑，胞体较大，分裂较活跃，处于分裂相细胞较多；随着雷帕霉素浓度增加

3、和作用时间延长，细胞增殖延缓、分裂相细胞减少、细胞变圆、皱缩、漂浮并破碎，死亡逐渐增加。(2)经CCK．8比色法观察发现，雷帕霉素能显著抑制人胰腺癌Panc．1细胞生长，并具有剂量一时间依赖性：不同浓度雷帕霉素(12．5，25，50，lOOng／m1)作用人胰腺癌Panc．1细胞24h、48h后，细胞活力随浓度增加、时间延长而逐渐降低，细胞增殖逐渐受到抑制。与对照组(0％)相比，24h组细胞抑制率分别为13．5％，29．7％，45．7％，52．1％；48h组细胞抑制率率分别为19．1％，33．6％，51．6％，59．7％，差异均有统计学意义(尸

4、的细胞抑制率相比，差异也均有统计学意义伊<0．01)；计算药物一细胞半数抑制浓度IC50为：75ng／ml。(3)经realtime—PCR测定，雷帕霉素能下调人胰腺癌Panc一1细胞hTERTmRNA表达水平：不同浓度雷帕霉素(12．5，25，50，100ng／m1)作用人胰腺癌Panc．1细胞48h后，与对照组(100％)相比，hTERTmRNA表达率分别为0．886±0．057，0．797±0．063，0．613±0．059，0．444±0．041，差异均有统计学意义(尸<0．01)。温州医学院硕士学位论文(4)经realtime．PCR测定，雷帕霉素能上调和下调某些P

5、ane．1细胞相关miRNA分子：表达上调到用药前两倍以上的有6个，表达下调到用药前50％以下的有4个。结论：(1)雷帕霉素对胰腺癌Panc．1细胞具有增殖抑制作用，并具有剂量一时间依赖性。(2)雷帕霉素诱导人胰腺癌细胞增殖抑制机制的可能途径之一为端粒酶途径。(3)雷帕霉素诱导人胰腺癌细胞增殖抑制的机制可能通过调节Panc．1细胞相关miRNA分子实现。(4)显著变化的miRNA分子如mir．34a，mir．221等则可能参与了hTERTmRNA表达(即转录水平)的调节。关键词：雷帕霉素；胰腺癌细胞；细胞增殖抑制；miRNA；hTERT温州医学院硕士学位论文Studyonth

6、eInhibitoryEffectsofRapamycintotheProliferationofPancreaticCancerCellsinVitroABSTRACTobjective：Toinvestigatethevariationofproliferation，thedynamicexpressionoftelomerasereversetranscriptase(hTERT)mRNAandpancreaticcancercellssignalingpathwayrelatedmiRNAmoleculesinPanc．．1cellspro．．andpost．．the

7、interventionofrapamycinwithdifferentconcentration．Moreover,toanalysetherelationshipamongtheproliferationandtheexpressionofhTERTmRNA，remarkablechanges．Thus，wecanfurtherexplorethemechanismoftheinhibitioneffectofrapamycinforPanc．1cellswillbefurtherexplored．