雷帕霉素抑制大鼠移植肝胆管上皮细胞增殖作用的研究

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1、雷帕霉素抑制大鼠移植肝胆管上皮细胞增殖作用的研究作者：陈莉萍戴睿武郭毅斌王曙光董家鸿'【摘要】目的探讨雷帕霉素对大鼠移植肝胆管上皮细胞增殖及其周围成纤维细胞活化的抑制作用。方法“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型，并随机分为供肝冷保存1h组、1h组、雷帕霉素组(冷保存1h组术后给予雷帕霉素)、对照组。分别于术后1、3、7、1d检测血清ALT、TB、ALP，免疫组化法检测各组胆管上皮细胞增殖率及肌纤维母细胞分布，并统计各组生存率。结果冷保存1h组术后生存率明显低于冷保存1h组(P=)，血清ALT>200IU/L、AL

2、P>160IU/L、TB>3.μmol/L，持续高于冷保存1h组(ALT【关键词】雷帕霉素；肝移植；冷保存；再灌注；胆管上皮细胞；增殖【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitiveeffectofrapamycinonproliferationofbiliaryepithelialcellsandactivationofperibiliaryfibroblastafterratlivertransplantation.MethodsAfterratlivertransp

3、lantationmodelwasmadebasedon“twocuff”method,SDratswererandomlydividedintocoldpreservation(CP)for1hourgroup(CP1hourgroup),CP1hoursgroup,rapamycingroup(CP1hoursgrouptreatedwithrapamycin)andcontrolgroup.Alanineaminotransferase(ALT),totalbilirubin(TB)andalkalinep

4、hosphatase(ALP)weredeterminedatdays1,,and1afterlivertransplantation.Immunohistochemicalmethodwasusedtodetectproliferationrateofbiliaryepithelialcellsanddistributionofmyofibroblasts,andsurvivalrateofeachgroupwasalsoanalyzed.ResultsThesurvivalrateinCP1hoursgrou

5、pwassignificantlylowerthanthatinCP1hourgroup(P=).InCP1hoursgroup,serumALTwas>200IU/L,ALP>160IU/LandTB>3.μmol/L,whichweresignificantlyhigherthanthoseinCP1hourgrouprespectively(ALT【Keywords】Rapamycin;Livertransplantation;Coldpreservation;Reperfusion;Biliaryepit

6、helialcells;Proliferation肝移植术后常见的胆道并发症为非吻合口狭窄，占所有胆道并发症的20%［1］，而冷保存再灌注对胆管树的直接损伤是此类并发症重要的因素。作为肝移植过程中不可避免的病理生理过程，冷保存再灌注直接损伤胆管上皮细胞，诱导正常情况下处于细胞周期静止状态的胆管上皮细胞发生增殖。这种对损伤做出的修复过程极有可能并发其他胆道疾病［2］。因此研究影响胆管上皮细胞增殖的因素对于临床防治胆道疾病具有重要意义。本研究是在大鼠原位肝移植模型基础上，探讨雷帕霉素对肝移植术后胆管上皮细胞增殖及

7、其周围肌纤维母细胞聚集的影响，旨在为临床防治移植肝胆道并发症提供新的策略。1材料与方法主要试剂与仪器兔抗增殖细胞核抗原多克隆抗体、鼠抗pSTAT3tyr705单克隆抗体均购自美国SantaCruz公司；ChemMateTMEnvision免疫组化试剂盒为丹麦Dako公司产品；RPM为美国惠氏百宫制药公司惠赠。动物模型与分组清洁级SD大鼠，体重220～250g，雄性，由第三军医大学大坪医院动物中心提供。按随机数字表法分为4组：(1)对照组；(2)冷保存1h组：供肝冷保存1h后行原位肝移植；(3)冷保存1h组：供

8、肝冷保存1h后行原位肝移植；(4)雷帕霉素组：冷保存1h组给予静注雷帕霉素mg/(kg·d)。大鼠原位肝移植模型制作参照刘骅等［3］的“二袖套法”原位肝移植模型并加以改良，显微外科缝合肝上下腔静脉、套接门静脉及肝下下腔静脉。利用小儿静脉留置针内蕊作为动脉支架管，直接对合供受体肝固有动脉，完成肝动脉重建。无肝期约1min。分别于术后1、3、7、1d取材，每组样本各8只。各组