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《雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究【摘要】目的：探讨新型免疫抑制药物雷帕霉素（RAPA）对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的抑制作用,并与传统免疫抑制药物比较作用效果。方法：用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的纯种近交系小鼠［供鼠为雄性C57BL/6J(H-2b)鼠,受鼠为雌性BALB/c(H-2d)鼠］建立allo-BMT/aGVHD动物模型，随机分5组，第1、2和3组分别给予RAPA、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)、RAPA加CsA加MTX联合用
2、药作为aGVHD抑制方案，第4组为空白对照，第5组为未移植组。观察各组小鼠骨髓移植后aGVHD的出现情况。结果：移植小鼠出现典型的aGVHD症状，未用aGVHD预防方案的移植小鼠(第4组)死亡高峰在移植后第5～7天,死亡率达100%。用不同aGVHD预防方案的第1～3组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间(MST)较第4组显著延长(分别延长3.5、1.9和6.0d,P<0.05)。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间，移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后,移植小鼠aGVHD病理表现减轻,且RAPA、
3、CsA和MTX联合用药组的病理分级轻于RAPA单药组或CsA加MTX标准方案组。结论：RAPA可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应，增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受，对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）有明显抑制作用，可减轻GVHD症状和病理损害程度，延长平均生存时间。【关键词】雷帕霉素；移植物抗宿主病；异基因骨髓移植；小鼠造血干细胞移植(hemopoieticstemcelltransplantation,HSCT)是目前治疗血液系统恶性肿瘤和非恶性遗传性缺陷的重要手段。对于许多没有相关全相合或无关全相合骨髓供者的恶性血
4、液病患者来说，用半相合的亲属或部分相合无关供者的骨髓作为干细胞来源，成为治疗恶性血液病的必然选择。但同种异体HSCT后移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease,GVHD)的发生率为50%～80%，移植相关死亡率约30%，严重影响患者的生存时间和生存质量，是临床异基因干细胞移植的障碍之一［1］。研究降低或减轻GVHD的发生率及程度的方法，对临床HSCT有重要意义。选用较强的联合免疫抑制方案预防和治疗HSCT后异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)成为解决问题的方法之一。本实验研究新型免疫抑制
5、药物雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对aGVHD的防治作用及其初步作用机制,选择C57BL/6J鼠(H-2b)、BALB/c鼠(H-2d)分别作为不相合基因移植的供、受者，建立aGVHD模型。用RAPA以及联合环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)对aGVHD的抑制作用进行了小鼠实验观察。1材料1.1实验动物供鼠：纯种近交系小鼠C57BL/6J(H-2b),雄性,清洁级,8～12周龄,购自扬州大学动物中心。受鼠：纯种近交系小鼠BALB/c(H-2d),雌性,清洁级,8～12周龄,购自扬州大学动物中心。小鼠饲养于东
6、南大学公共卫生学院SPF级动物房内。垫料经高温消毒,移植后20d内每天更换垫料,饲料经60Co照射灭菌,饮水中加入红霉素250mg·L-1、庆大霉素320mg·L-1，于移植前5d开始饮用。1.2主要试剂RAPA为美国惠氏制药公司产品,CsA为瑞士Sandoz公司产品,MTX为上海华联制药公司产品。2方法2.1全身照射采用60Co(南京市第二医院放疗中心)γ射线作全身照射,剂量率500cGy·min-1,总剂量8.0Gy。2.2骨髓移植无菌条件下采集C57BL/6J小鼠股骨，用注射器吸取RPMI1640培养液反复冲洗骨髓腔
7、制成细胞悬液，过4号针头使之成为单细胞悬液,采用淋巴细胞分离液(密度1.083g·ml-1)分离单个核细胞，调整细胞浓度为1×108ml-1。将脾脏在200目筛网上研磨成单个细胞，0.83%NH4Cl溶解红细胞,调整细胞浓度为1×108ml-1。受鼠BALB/c在全身照射后6～8h接受骨髓移植(经尾静脉输注骨髓和脾细胞悬液0.2ml·只-1)。2.3实验动物分组小鼠随机分为第1、2、3、4、5共5组，每组10只：(1)第1组小鼠RAPA1.5mg·kg-1·d-1灌胃，从移植后第1天(+1d)开始用药；(2)第2组小鼠给予
8、CsA加MTX，CsA1.5mg·kg-1·d-1腹腔注射，从移植后+1d开始用药，当小鼠的胃肠功能逐渐恢复后改为CsA5mg·kg-1·d-1灌胃，MTX0.4mg·kg-1·d-1腹腔注射，移植后+1,+3,+6,+11d用药；(3)第3组小鼠给予RAPA(1.5mg·kg-1·d-1)联合CsA+
