tem116型esbl天然酶与重组酶的动力学特性研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果TEM116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性研究编辑。作者：曾贤铭陈秀枢王震吕建新楼永良孙长贵陆永绥【摘要】目的研究TEM116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性，并比较它们的差异。方法采用紫外分光光度法检测酶促抗生素水解反应，以LeeWilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理，测定天然酶与重组酶的Km、Vmax及kcat。观察温度和pH对酶促反应的影响。结果以LeeWilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理方便而准确地测定了天

2、然酶与重组酶的Km与Vmax并计算出kcat。温度和pH对天然酶与重组酶酶促反应效应相似。天然酶与重组酶最优先的底物均为头孢哌酮，其次是头孢氨苄；对氨苄西林、阿莫西林、青霉素和哌拉西林有最高的催化效率。结论天然酶与重组酶的动力学参数无显著差异。【关键词】动力学β内酰胺酶重组蛋白β内酰胺类抗生素KineticcharacteristicsofnativeandrecombinantTEM11betalactamasesABSTRACTObjectiveToinvestigateandcomparethekineticcharacteristicsofnativeandrecombin

3、antTEM11betalactamases.MethodsHydrolysisreactions课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果ofbetalactamantibioticsweredetectedbyultravioletphotometry.DatawasprocessedaccordingtoLeeandWilson′simproveddoublerecipr

4、ocalequation.KineticparametersofnativeandrecombinantTEM11betalactamases,includingKm,Vmaxandkcat,weredetermined.EffectsoftemperatureandpHonenzymaticreactionwereobserved.ResultsMichaelesconstant(Km)andmaximalvelocity(Vmax)wereobtainedbymeansofLeeandWilson′simproveddoublereciprocalequation,andth

5、ecatalyticconstant(kcat)wascalculated.ThereweresimilarpHortemperatureeffectsonEithernativeorrecombinantbetalactamases.ThemostpreferentialsubstrateforbothnativeandrecombinantTEM11betalactamasesiscefoperazoneandfollowedbythenextcephalexin.Amongthehighestcatalyticefficiencyareampicillin,amoxicil

6、lin,penicillinandpiperacillin.ConclusionThereisnodifferenceofkineticcharacteristicsbetweennativeandrecombinantTEM11betalactamases.KEYWORDSKinetics;Betalactamases;RecombinantprotEIns;Betalactamantibiotics课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。

7、课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果ESBLs的产生机制是细菌在抗生素选择压力下，由TEM1或TEM2型酶的活性中心发生一个或数个位点的突变，导致底物谱的超广谱化［1］。XX年首先分离自Klebsiellapneumonia和Escherichiacoli临床株的TEM116型超广谱β内酰胺酶(extendedspectrumbetalactamases，ESBL)是病原菌产生的一种耐药酶，能够催化