三种重要检测用酶重组表达及酶学特性的研究

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2、■■■一⑧Author’Ssignature：一●·Supervlsor7Ssignature：Thesisreviewer1：Thesisreviewer2：Thesisreviewer3：Thesisreviewer4．Thesisreviewer5：Chair：(Committeeoforaldefence)Committeeman1：Committeeman2：Committeeman3：Committeeman4．Committeeman5：Dateoforaldefence：浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下

3、进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙婆太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：办1砰签字日期：为，矿年3月尹日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙垫太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

4、(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：籼；年导师签名：蒋弋今签字日期：2口，2年弓月浙江大学硕士学位论文致谢本课题的研究工作是在徐志南、蔡谨和黄磊老师的严格要求和细心指导下完成的。首先感谢徐志南教授为我们营造了良好的学术氛围和科研环境。徐老师开拓创新的学者风范、博大的胸怀和诚恳的为人、磊落的品质、渊博的学识、严谨的治学风范和达观进取的人生态度值得我终生学习。由衷地感谢我的导师蔡谨老师，蔡老师深厚的理论基础、活跃的思维、对科研工作的执着追求给我留下了深刻的印象，使我受益匪浅。三年的研究生生涯虽然短暂，但老师对我的教诲对我的一生都将产生重要的影响

5、，在此，学生向您表示最诚挚、最衷心的感谢。感谢课题组指导老师黄磊老师给予我的帮助和鼓励。感谢三年以来与我互勉共励的课题组全体成员，特别感谢博士生盛嘉元、郑强、祝琳琪、张绪、张慧莉、施周铭、朱凡、李晓燕、赵伟军、濮悦、唐云平、王海骄、闻志强等；硕士生张丹萍、陈旭、于怡、潘剑峰、王金、任永海、郑书香、宗超、杨俊、林逸君等人的热情帮助，在此一并表示感谢。他们对本文的工作提供了不少参考性意见，为研究工作的如期完成提供了重要帮助。还有许多帮助过我的同学没有一一列出，在此一并表示感谢。本工作是国家科技研究与发展项目(2011AA02A114)的部分内容。本人能顺利完成学业

6、，与父母、亲人的关心、帮助和激励是分不开的，在此谨向父母、亲人表示衷心的感谢和深深的敬意。他们不仅在学业上，还在生活上给予了我许多帮助。谨向所有关心和帮助过本人的老师、同学、朋友和亲人再次表示衷心的感谢!刘云平二零一一年一月于求是园浙江大学硕士学位论文摘要碱性磷酸酶，谷氨酸氧化酶和乙醇氧化酶在食品或医学检测等领域具有重要的应用价值。本工作以提高重组蛋白在大肠杆菌和毕赤酵母表达系统中的表达量为目的。首先以碱性磷酸酶(Apase)和谷氨酸氧化酶(Gox)为目标蛋白，通过选择合适的策略来提高它们在大肠杆菌中的可溶表达量；接着以乙醇氧化酶(AOX)为目标蛋白，通过培养

7、条件与诱导条件优化来提高其在毕赤酵母中的产量，特别是提高其蛋白的分泌表达。探究它们的功能特性，为开发简便、高效的检测方法提供必要的功能蛋白。首先分析了不同大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)，Rosetta(DE3)，C41(DE3)和C43(DE3)对碱性磷酸酶可溶表达的影响，结果表明APase在Rosetta(DE3)中的表可溶表达量最高。该重组APase对表面活性剂和蛋白酶有一定的耐受性，另外，金属离子ca2+与M92+对该酶的活性有促进作用。对于谷氨酸氧化酶，本文将构建好的重组质粒pET28a-GOX转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达，蛋白可

8、溶表达量可以达到234mg／L，重组谷