山羊高尔基体α-甘露糖苷酶ⅱ基因的克隆、表达及酶特性研究

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1、分类号：S858.27学校代码：10712UDC：636研究生学号：2012051345密级：公开灶衣林奇祆大学2015届攻读硕士学位研究生学位（毕业）论文山羊高尔基体a-甘露糖苷酶II基因的克隆、表达及酶特性研究学科专业临床兽医学研究方向动物临床疾病研究生__________李建飞指导教师李勤凡副教授完成时间2015年5月中国陕西杨凌研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的硕士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法

2、律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：w/r年名月么曰导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的硕士研究生._所呈交的硕士学位（毕业）论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规

3、范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。导师签名：时间：xjr年6月1曰关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕业）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕业）论文的全邵或部分内容授权汇编录入《中国优秀石贞士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技欠学后，发表或者使用本学位（毕业）论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署

4、名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人（包括研究生本人）未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）研究生签名：时间：7^11年6月义曰导师签名：("L时间：>/了年（月之曰Classificationcode:S858.27Universitycode:10712UDC:636Postg

5、raduatenumber:2012051345Confidentialitylevel:PublicityThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015CLONING,EXPRESSIONANDCHARACTERIZATIONOFCAPRAHIRCUSGOLGI-MANNOSIDASEⅡMajor:ClinicalVeterinaryMedicineResearchfield:AnimalclinicaldiseasesNameofPostgraduate:LiJian-feiAdviser:Associate-Prof.

6、LiQin-fanDateofsubmission:May2015YanglingShaanxiChina山羊高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ基因的克隆、表达及酶特性研究摘要高尔基体α-甘露糖苷酶II(Golgiα-mannosidase,GMII)是N-糖基化过程的一个关键酶。研究表明，GMII被抑制后肿瘤细胞的生长和转移能力明显降低，GMII抑制剂苦马豆素（swainsonine,SW）已被证实具有抗肿瘤效果，但SW可同时抑制溶酶体α-甘露糖苷酶导致溶酶体贮积症。因此，对GMII进行特异性抑制成为抗肿瘤治疗的重要途径。研究GMII结构可以充分理解其催化和抑制机制，为GMII的特异性抑制

7、提供分子和理论基础。目前，仅报道了果蝇GMII的晶体结构，GMII的基因序列仅从果蝇、鼠类、人、拟南芥属等种属中提取，其蛋白表达也局限于在细胞中进行。对哺乳动物GMII的深入研究还尚未进行，这大大缩小了GMII的抗肿瘤研究范围。本试验，以山羊为研究对象，通过反转录PCR技术获得山羊GMII（chGMII）的cDNA序列，利用毕赤酵母表达系统表达该蛋白，通过同源建模和分子对接等生物信息学技术对其空间结构和活性位点进行预测，为进一步对哺乳动物的抗肿瘤试验研究打下分子基础。