沉默高尔基体α-甘露糖苷酶ⅱ对胃部细胞黏附的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文沉默高尔基体α--甘露糖苷酶Ⅱ对胃部细胞黏附的影响姓名：杨紫汐申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：易永芬201205重庆医科大学硕士研究生学位论文沉默高尔基体Q一甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞黏附的影响摘要目的：探讨沉默高尔基体Q一甘露糖苷酶II(GMII)对人胃癌细胞株BGC一823黏附活性的影响及其可能相关机制。方法：通过脂质体Lipofectamine2000将GMII—shRNA真核表达质粒载体转染至人胃癌细胞株BGC一823，利用免疫荧光观察其转染效率。用RT—PCR、Westernblot方法检测转染细胞GMlI、CD44及E—selectin

2、mRNA和蛋白表达水平的变化。用MTT比色试验测定胃癌细胞在细胞外c基质上黏附能力的变化。通过胃癌细胞对RoseBengal的摄取测定其与血管内皮细胞黏附能力的变化。结果：成功将GMII—shRNA真核表达质粒载体转染至人胃癌细胞株BGC一823。转染后胃癌细胞GMII及CD44的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P

3、细胞与血管内皮细胞黏附试验结果显示，转染GMII—shRNA真核表达质粒组细胞的吸光度A值明显低于转染空载体组和空白对照组(P

4、，黏附EFFECToFRNAINTERFERENCETARGETINGGMⅡoNADHESIoNoFGASTRICCELLSABSTRACTObjective：TranSfectedthes删AplasmidofhumanG0培i弘lna彻osldaseII(GMII)t0gastriccancercenIineBGC一823，identi匆itsexpressioniIlBGC-823，andinvestigateitse腩ctonadhesionofthecells·Memods：Trans胁edtheGMII．shRNAplasmidtoBGC-823with1ipofe咖1me'

5、andthetransfectionefficiencyⅥ娜provedbyFluoresc饥ceMicroscopy．RT．PCRwe‘eusedt0detefmmethemRNAexpressioIlsofGMⅡ、CD44andE。seledmaRertransfection．wresternblot、ⅣereuSedt0detecttheprotemeXpressionsofGMII、CD44andE．selectiIlaRer仃ansfection．AMTTassayandanadhesionteStwereusedt0一⋯一dete嗍inetheB(祀．823Cell’sadh

6、esiVeabilityaRer仃aIlSfectiorLResults：TheGMII．shI矾AplasmidwassuCcessfullytmllsfected．Rr-PCRandwest锄blota11alysisindicatedthatmRNAandproteineXpressionofGM11wasdown-regulatedsignifiCantlyi11gastriccancercelllineBGC-823aRertms触ion(P<0．05)．MrrandadhesionteStshowedthatthegroupwithGMII。s删Aledtoa10weradh

7、esiveabil“ytIlanothers(P<0．05)．Comparet0theC0ntrol鲈oup，‘hegrouptransf＆tedwithGMII．shI矾Ashowed0bViously10w可CD44n‘武NAanadproteinexpreSsion(P<0．05)．AmdE—selectill’smI冰Aandprotein能presslonwaSn0‘changeobViously．Conclusion：T