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时间:2018-08-01
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1、RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响作者:祁卫东蒋鹏程张恒马圭范钰【摘要】目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:培养人胃癌BGC823、HGC27、MGC803及SGC7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者。采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden
2、方法检测癌细胞侵袭力。结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC823细胞最高;以MKsiRNA转染胃癌BGC823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降。结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力。【关键词】胃癌;中期因子;RNA干扰;黏附;侵袭 [Abstract]Objective:Tostudytheeffectsofmidkine(MK)g
3、enesmallinterferingRNA(siRNA)onadhesionandinvasionof12humangastriccancercell.Methods:RealtimePCRwasusedtoevaluatetheMKmRNAexpressionofhumangastriccancercelllinesBGC823,HGC27,MGC803andSGC7901.ThecellofMKhighestexpressionwastransfectedwithdifferentdoseofMKsiR
4、NA.TheexpressionofMKmRNAandproteinwereweredeterminedbyrealtimequantitativePCRandimmumoflurescencemethod.ThecelladhesionwasevaluatedbyMTTassay,andinvasionwasexminedbyBoydenchamber,respectively.Results:CelllineBGC823showedthehighestelevationofMKmRNAinfourgastri
5、ccancercelllines.TheresultsfromrealtimequantitativePCRandimmumoflurescencemethodshowedthatMKmRNAandproteinreducedintimeanddosedependentmanners(P<0.01;P<0.01).Theadhesive,andinvasiveabilityofBGC823celltreatedwithMKsiRNAdecreasedcomparedwithcontrolgroup
6、s(P<0.01,P<0.01).Conclusion:MKgenemightplayanimportantroleinadhesionandinvasionofhumangastriccancercell.siRNAtargetedMKcouldeffectivelyinhibitadhesion,migration,andinvasionofhumangastriccancercell. [Keywords]gastriccarcinoma;midkine;RNAinterference;adhes
7、ion;invasion12 尽管胃癌的诊断和治疗已经有了长足的进步,但进展期胃癌的预后依然很差,5年生存率徘徊在20%~30%。己经证实,胃癌的发生发展是多基因改变的结果。胃癌中特殊基因的表达异常在不同的细胞功能中发挥了重要作用,如细胞黏附、信号传导、细胞分化、细胞增殖及转移。更好地了解胃癌发生发展的分子机制将有利于胃癌的诊治及预防。 许多研究表明生长因子不仅促进组织细胞的增殖,而且能诱导组织细胞的恶性转化,在肿瘤的发展中发挥了重要的角色。中期因子(midkine,MK)基因是1988年Muramatsu等[1
8、]在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系HM1细胞cDNA文库中发现的一种新基因,其后,在多种动物和人类中均已发现了中期因子基因。中期因子和另一种相似的细胞因子——多效生长因子(pleiotrophin,PTN)一起归为一类新的肝素结合因子家族(heparinbindingfactorfamily)[1]。研究发现,中期因子在许多肿瘤如食管癌、结肠
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