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时间:2018-08-01
《rnai沉默prl1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、RNAi沉默PRL1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响作者:钟锡明,范钰,张瑞佳,郑金旭【摘要】 目的:探讨RNA干扰(RNAinterference,RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphataseofregeneratinglivercell1,PRL1)基因对肺癌细胞侵袭力的影响。方法:应用PRL1基因小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)转染处理肺癌A549细胞后,分别采用实时定量RTPCR和蛋白质印迹检测PRL1基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖
2、性增殖和侵袭能力。结果:与对照组比较,siRNA转染组PRL1mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。体外试验发现,PRL1siRNA可有效抑制肺癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P<0.05,P<0.05)。结论:PRL1基因在肺癌侵袭中起着重要的作用,采用PRL1siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭。【关键词】肺肿瘤;促肝细胞再生磷酸酶1;侵袭;RNA干扰;小干扰RNA [Abstract]Objective:Tostudytheeffectsandmechanismofphosp
3、hataseofregeneratinglivercell1(PRL121)smallinterferingRNA(siRNA)oninvasionofhumanlungcancercell.Methods:AfterlungcancercelllineA549weretransfectedbyPRL1siRNA,themRNAandproteinofPRL1weredeterminedbyrealtimeRTPCRandwesternblotassay,respectively.Theanchorageindependentgrowthwasexm
4、inedbyclonformationinsoftagar,andinvasionabilitywasevaluatedbyboydenchambermodel.Results:ThesiRNAcoulddownregulatethelevelofmRNAandproteinofPRL1inadoseandtimedependentmanner.SuppressionofofPRL1expressioncaninhibitinvasionabilityandanchorageindependentgrowthindosedependentmanne
5、rs(P<0.05,P<0.05).Conclusion:PRL1genemightplayanimportantroleindevelopmentofhumanlungcancer,anddownregulationbyPRL1siRNAcouldinhibitinvasionofhumanlungcancercell. [Keywords]lungcarcinoma;phosphataseofregeneratinglivercell1;invasion;RNAinterference;smallinterferingRNA蛋白酪氨酸磷
6、酸酶(proteintyrosinephosphatase,PTP)在蛋白磷酸化和去磷酸化平衡中起着重要的作用。促肝再生磷酸酶(phosphataseofregenerating12liver,PRLs)是PTP酶家族重要成员之一,该基因家族包括PRL1,PRL2,PRL3三个成员,它们分别定位在6q12,1p35,8q24.3染色体上,彼此之间的同源性高达76%~85%[1,2]。 许多实验研究发现,PRLs分子能导致细胞的恶性转化并且增强肿瘤细胞的增殖、移动、浸润和转移能力[3-10]。但目前对PRL1基因在肺癌细胞侵袭中的研究甚少。本研究借助于R
7、NA干扰(RNAinterference,RNAi)技术,以合成的PRL1基因小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)转染处理肺癌A549细胞,观察了PRL1siRNA转染对癌细胞侵袭力的影响。1材料与方法 1.1材料 人肺癌A549细胞,购自上海生命科学院。PRL1siRNA序列(5′GAUGCAGUUCAGUUUAUAATT3′和5′UUAUAAACUGAACUGCAUCTT3′),由美国Dharmacon公司合成。PRL1抗体购自SantaCruz公司。Trizol,RNase抑制剂,逆转录酶SSRTⅡ,Taq
8、酶和转染试剂Oligof
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