rnai沉默erk12基因对胃癌sgc7901细胞株ezrin表达及侵袭迁移能力的影响

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1、南昌大学硕士学位论文RNAi沉默ERK1/2基因对胃癌SGC7901细胞株Ezrin表达及侵袭迁移能力的影响姓名：涂轶申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：梅金红201206摘要lIIIIIIIIIIIIIUI—Y2157776目的：探讨RNA干扰抑制ERKl／2基因表达对胃癌细胞株SGC7901Ezrin表达及细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：免疫组化法检测Ezrin蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中的表达情况。常规培养SGC7901细胞株，针对人ERKl及ERK2基因序列，选取并设计RNA干扰靶点，构建ERKl／2RNA干扰质粒。应用脂质

2、体Lipofectamine2000TM将RNA干扰质粒转染入SGC7901细胞。采用RT．PCR和Western免疫蛋白印迹法检测ERKl、ERK2的表达及Ezrin的表达情况。用Tranwell小室检测转染后SGC7901细胞株的侵袭转移能力变化情况。结果：1、免疫组化结果显示Ezfin蛋白在胃癌组织中呈明显高表达，阳性率为88．75％，而在癌旁正常黏膜组织中表达阳性率为23．75％，两者存在显著差异性。2、对转染48小时后的SGC7901细胞进行RT-PCR和WesternBlot检测细胞系ERKl、ERK2、Ezrin基因mRNA和蛋白表达情况的结

3、果显示，经过RNA干扰ERKl／2的表达，细胞内ERKl、ERK2mRNA及蛋白表达水平明显下降，Ezrin在ERKl及ERK2RNA干扰质粒组中mRNA及蛋白表达明显下调。3、Transwell小室检测SGC7901细胞系在转染ERKI／2RNA干扰质粒24h后侵袭迁移能力结果表明，ERKl及ERK2RNA干扰组细胞的侵袭和迁移能力均明显下降。结论：1、Ezrin在胃癌组织中高表达。2、RNA干扰EIⅨl／2后可下调SGC7901细胞EzrinmRNA及蛋白的表达。3、RNA干扰ERKl／2均可使SGC7901细胞的侵袭和迁移能力下降。关键词：胃癌；ER

4、Kl／2；Ezrin；侵袭转移AbstractABSTRACTobjective：ToinvestigaterelationshipbetweentheRNAisilencingofERKl／2andexpressionofEzringeneinhumangastriccancerinvitro．Methods：TheexpressionofEzrinin80specimensofgastriccarcinoma．80specimensofnormalgastrictissuesweredetectedbyimmunohistochemistrymetho

5、d．ConventionalcultureofgastriccancercellsSGC7901，twosiRNAstargetingERK1andERK2respectivelyweredesignedandsynthesizedaccordingtoitsmRNA，andtheircorrespondingexpressionvectorswereconstructedandtransfectedintoSGC7901cellwithLipofectamineⅣ2000．TheinhibitionofERKlandERK2expression，toge

6、therwiththeexpressionofEzrinwereanalyzedbyRT-PCR，theproteinlevelofthosegenesweredetectedbywesternblotanalysis．Transwellmethodwasappliedtomeasurecellinvasionandmigration．Results：Innormalgastrictissuesandgastriccarcinoma，thepercentageofEzrinpositiveexpressionwas23．75％and88．75％，respe

7、ctively．Thedifferencehasastatifticalsignificance(P

8、hsignificientlydecreasedcellinvas