rnai沉默prl1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响

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1、RNAi沉默PRL1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响：钟锡明，范钰，张瑞佳，郑金旭【摘要】　　目的：探讨RNA干扰(RNAinterference，RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphataseofregeneratinglivercell1，PRL1)基因对肺癌细胞侵袭力的影响。方法：应用PRL1基因小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）转染处理肺癌A549细胞后，分别采用实时定量RTPCR和蛋白质印迹检测PRL1基因mRNA和蛋白水平，分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和

2、侵袭能力。结果：与对照组比较，siRNA转染组PRL1mRNA和蛋白水平明显下调，且呈浓度和时间依赖性（P<0.05，P<0.05）。体外试验发现，PRL1siRNA可有效抑制肺癌细胞集落生长和侵袭能力，且与浓度相关（P<0.05，P<0.05）。结论：PRL1基因在肺癌侵袭中起着重要的作用，采用PRL1siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭。【关键词】肺肿瘤；促肝细胞再生磷酸酶1；侵袭；RNA干扰；小干扰RNA　　［Abstract］Objective:Tostudytheeffectsandmechanismofphosphatase

3、ofregeneratinglivercell1（PRL1）smallinterferingRNA（siRNA）oninvasionofhumanlungcancercell.Methods：AfterlungcancercelllineA549RNAandproteinofPRL1inedbyrealtimeRTPCRandinedbyclonformationinsoftagar,andinvasionabilitybermodel.Results：ThesiRNAcoulddoRNAandproteinofPRL1inadoseandtimede

4、pendentmanner.SuppressionofofPRL1expressioncaninhibitinvasionabilityandanchorageindependentgroanners（P<0.05,P<0.05）.Conclusion：PRL1genemightplayanimportantroleindevelopmentofhumanlungcancer,anddoanlungcancercell.　　［Keya；phosphataseofregeneratinglivercell1；invasion；RNAinterfer

5、ence；smallinterferingRNA蛋白酪氨酸磷酸酶(proteintyrosinephosphatase,PTP)在蛋白磷酸化和去磷酸化平衡中起着重要的作用。促肝再生磷酸酶(phosphataseofregeneratingliver,PRLs)是PTP酶家族重要成员之一，该基因家族包括PRL1，PRL2，PRL3三个成员,它们分别定位在6q12,1p35,8q24.3染色体上,彼此之间的同源性高达76%～85%［1，2］。　　许多实验研究发现，PRLs分子能导致细胞的恶性转化并且增强肿瘤细胞的增殖、移动、浸润和转移能力［3-10］。但目前对PR

6、L1基因在肺癌细胞侵袭中的研究甚少。本研究借助于RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术，以合成的PRL1基因小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）转染处理肺癌A549细胞，观察了PRL1siRNA转染对癌细胞侵袭力的影响。1材料与方法　　1.1材料　　人肺癌A549细胞，购自上海生命科学院。PRL1siRNA序列（5′GAUGCAGUUCAGUUUAUAATT3′和5′UUAUAAACUGAACUGCAUCTT3′），由美国Dharmacon公司合成。PRL1抗体购自SantaCruz公司。Trizo

7、l，RNase抑制剂，逆转录酶SSRTⅡ，Taq酶和转染试剂Oligofectamine购自美国Invitrogen公司。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养及转染处理　　肺癌A549细胞在含10％胎牛血清的RBMI1640培养液、37℃、5％CO2、饱和湿度环境的条件下连续培养。转染前1天，将1.0×105对数期生长的细胞接种于24孔培养板，1ml/孔，培养过夜。次日进行转染。基本操作按说明书进行。细胞分组：（1）空白对照组（ConA）：未经任何处理的肺癌细胞；（2）空载对照组（ConB）：即脂质体对照组；（3）错配对照组（ConC）；（4）siRNA组