shrna沉默tpx2基因对人肺癌细胞株a549增殖及侵袭的影响

《shrna沉默tpx2基因对人肺癌细胞株a549增殖及侵袭的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文shRNA沉默TPX2基因对人肺癌细胞株A549增殖及侵袭的影响姓名：唐熹申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：张徽201205重庆医科大学硕士研究生学位论文shRNA沉默TPX2基因对人肺腺癌细胞株A549增殖及侵袭的影响摘要目的：TPX2(TargetingforXklp2)基因是近年发现的一个参与细胞有丝分裂过程的基因，与多种恶性肿瘤增殖凋亡，侵袭转移等密切相关。本实验第一部分构建靶向人TPX2基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)表达载体，第二部分检测人肺腺癌A549细胞增殖及侵袭能力的变化；为肺腺癌的临床治

2、疗提供思路及理论数据。方法：构建TPX2基因的特异shRNA表达质粒，采用脂质体2000稳定转入A549细胞后，借助RT-PCR，westernblot检测TPX2、增殖相关基因(CDK4，CyclinDl)及侵袭相关基因(MMP2)表达水平的变化，MTT法检测细胞增殖的变化，Transwell实验观察对细胞侵袭力的影响。结果：成功构建能有效沉默TPX2基因表达的TPX2shRNA质粒，该质粒能使TPX2基因在mRNA及蛋白水平表达均受到显著抑制，抑制率分别为73．8％及80．2．％(P<0．05)；增殖相关基因(CDK4，CyclinDl)mRNA的表达降低了76．69％及67

3、．28％(P<0．05)，侵袭相关基因MMP2蛋白表达量降低了58％(P<0．05)；也明显降低了肺腺癌A549细胞的增殖活性及侵袭能力。结论：抑制TPX2基因的表达后，A549细胞的生长受到抑制，增2重庆垦型奎堂堡主堕窒生堂垡鲨塞———————————————————————————————————一殖及侵袭能力明显减弱，提示TPX2基因有可能成为未来肺腺癌的潜在治疗靶点。关键词：TPX2基因；shRNA：增殖；侵袭EFFECTOFTPX2SHRNAONPROLIFERATIONANDINVASIONOFHUMANLUNGADENOMAA549CELLSABSTRACTObje

4、ctive：TPX2(TargetingforXklp2)isarecentlydiscoveredgenewhichinvolvesincellmitosisandismutuallyrelatedtoproliferation，apoptosis，invasionandmetastasisofvariouscancers．shRNADlasmidtargetingTPX2genewasconstructedinthefirstpartoftheresearchandtheeffectofproliferationandinvasiononhumanlungadenomaA54

5、9cellswasobservedinthesecondpart．Itprovidesdatasandthoughtforclinicaltreatmentoflungadenoma．Methods：SpecificshRNAplasmidsforTPX2genewereconstructedandwerestablytransfectedintoA549cellsbylipofectamine2000·ExpressionlevelofTPX2gene，theproliferation．relatedgenes(CDK4andCyclinD1)andtheinvasion—re

6、latedgene(MMP2)wereobservedbyRT-PCRandwesternblot．MTTmeasureditsefiectsonproliferation．ThecellularinvasionwastestedbyTranswellchambers．Results：TheTPX2shRNAplasmidforhumanTPX2genewasconstructedsuccessfully．ItinhibitedtheexpressionofthemRNAandtheproteinofTPX2generemarkablyandtheinhibitionratesW

7、ere73．8％and4重庆医科大学硕士研究生学位论文80．2％(P