强力霉素对人肺癌细胞系增殖及侵袭行为的影响

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1、强力霉素对人肺癌细胞系增殖及侵袭行为的影响【关键词】肺癌基质金属蛋白酶强力霉素侵袭　　Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofdoxycyclineontheproliferation,expressionofmatrixmetalloproteinase-2(MMP2)andtheinvasivenessoflungcancercarcinomacelllineA549invitro．MethodsMTTassayg/L）ontheproliferationofA549.Immunohistochemistrysta

2、inandmillicellporechamberg/L）treatedA549cells．ResultsDoxycyclinemorethan10mg/LinhibitedtheproliferationofA549inanoseandtimedependentmanners.Doxycyclinemorethan5mg/LinhibitedtheexpressionofMMP2andinvasivenessnofA549.ConclusionDoxycyclinecaninhibittheproliferation,invasivenessandm

3、etastasisofA549andthemechanismofatrixmetalloproteinase；doxycycline;invasiveness　　肺癌是一种发病率及死亡率极高的恶性肿瘤，对人类健康的危害日益严重。尽管治疗手段在不断发展，肺癌患者的生存时间并没有明显延长。癌细胞的侵袭和转移是影响其疗效的主要原因，因此，寻找有效手段干预癌细胞的侵袭、转移成为肺癌研究的一个重要方向。基质金属蛋白酶因参与了侵袭转移的各个环节，故而成为肿瘤治疗的一个重要靶标。研究表明，在肿瘤侵袭转移中，MMPs不仅可降解细胞外基质，而且可维持肿瘤微环境并促进肿瘤生长

4、［1］、调解细胞粘附［2］、能增强上皮细胞的运动能力［3］，从而参与肿瘤的侵袭转移。还有研究证实MMP-2、MMP-9和MT1-MMP等在血管形成过程中发挥重要作用［4］。细胞外基质金属蛋白酶诱导剂EMMPRIN可以通过刺激MMP和VEGF的表达，促进肿瘤血管形成和肿瘤生长［5］。而强力霉素除了具有广谱的抗菌作用外，还有抑制基质金属蛋白酶的功能［6-8］。本研究采用免疫组化、MTT及Millicell小室法，观察强力霉素对人肺癌细胞系A549细胞表达基质金属蛋白酶2(MMP2)及肿瘤的生长、侵袭和转移的影响,为强力霉素治疗肺癌提供理论依据。　　1材料和方法

5、　　1.1材料　　强力霉素、DMEM、MTT试剂、DMSO均购自Sigma公司；胎牛血清购自康利达生物制品公司；胰酶、Millicell-pore购自美国Costar公司；SABC免疫组化试剂盒及抗MMP-2单抗购自武汉博思德公司；Matrigel为BectonDickinson公司产品。其余试剂均为国产分析纯。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养：肺腺癌细胞系A549细胞由第四军医大学口腔生物教研室提供。细胞培养于DMEM培养液中(含100mL／L胎牛血清、100U／mL青霉素、100mg／mL链霉素)，在37℃体积分数为5％CO2培养箱内培养。　　1.

6、2.2药物对细胞增殖作用的测定：取对数生长期的A549细胞，用0.25g/L的胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，将单细胞悬液以5×104/mL的密度接种于96孔板，每孔200μL，37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养。培养过夜后，分别加入含有不同浓度强力霉素的培养液，终浓度分别为2.5、5、10、20、50mg/L，对照组加入相同体积的培养液。每一浓度设6个复孔，分别继续培养24、48、72h。实验结束前4h，每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL，继续培养4h后，吸弃上清，每孔加入150μLDMSO,振荡15min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪上，以

7、波长490nm测定各孔吸光度(A)值。观察强力霉素对A549细胞生长的影响。　　1.2.3Millicell细胞移行实验：将Matrigel以0.5mg/mL的浓度溶于凉蒸馏水中。以每室50μL加入Millicell小室，置超镜台上风干。放入已加入600μL含0.1%牛血清白蛋白的DMEM培养液的下小室，37℃孵育1h取出备用。用胰酶将不同浓度(2.5、5、10、20mg/L)的强力霉素干预48h后的A549细胞消化，重悬于含0.1%牛血清白蛋白的DMEM培养液中，成单细胞悬液，调整细胞计数为1×105/mL,以200μL/室加入Millicell小室，并

8、加入上述浓度强力霉素，对照组不加强力霉素。将Millicell小室