强力霉素对人肺癌细胞系增殖及侵袭行为的影响

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1、强力霉素对人肺癌细胞系增殖及侵袭行为的影响【摘要】目的探讨强力霉素对人肺癌细胞系A549细胞的增殖和体外侵袭能力及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法采用MTT比色法研究不同浓度强力霉素(2.5、5、10、20、50mg/L)对A549细胞增殖的影响，免疫组织化学方法和Millicell-pore小室法，研究不同浓度强力霉素(2.5、5、10、20mg/L)作用后，A549细胞MMP-2蛋白表达及其体外侵袭转移能力的影响。结果10mg/L以上强力霉素可以抑制A549细胞增殖，5mg/L以上强力霉素可以抑制A549细胞中MMP-2蛋白的表达及体外侵袭。结论强

2、力霉素可以抑制A549细胞增殖及体外侵袭，其抑制A549细胞侵袭及转移的作用与其抑制MMP-2的表达有关。【关键词】肺癌基质金属蛋白酶强力霉素侵袭　　Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofdoxycyclineontheproliferation,expressionofmatrixmetalloproteinase-2(MMP2)andtheinvasivenessoflungcancercarcinomacelllineA549invitro．MethodsMTTassaywasappliedtostudytheeffectso

3、fdoxycycline（2.5，5，10，20，50mg/L）ontheproliferationofA549.ImmunohistochemistrystainandmillicellporechamberwereusedtoinvestigatetheexpressionofMMP2andthe12invasiveabilityofdifferentconcentrationofdoxycycline（2.5，5，10，20mg/L）treatedA549cells．ResultsDoxycyclinemorethan10mg/Linhibitedthepr

4、oliferationofA549inanoseandtimedependentmanners.Doxycyclinemorethan5mg/LinhibitedtheexpressionofMMP2andinvasivenessnofA549.ConclusionDoxycyclinecaninhibittheproliferation,invasivenessandmetastasisofA549andthemechanismofwhichisrelatedtotheinhibitionofMMP2inA549cel1．　　Keywords:lungcancer

5、；matrixmetalloproteinase；doxycycline;invasiveness12　　肺癌是一种发病率及死亡率极高的恶性肿瘤，对人类健康的危害日益严重。尽管治疗手段在不断发展，肺癌患者的生存时间并没有明显延长。癌细胞的侵袭和转移是影响其疗效的主要原因，因此，寻找有效手段干预癌细胞的侵袭、转移成为肺癌研究的一个重要方向。基质金属蛋白酶因参与了侵袭转移的各个环节，故而成为肿瘤治疗的一个重要靶标。研究表明，在肿瘤侵袭转移中，MMPs不仅可降解细胞外基质，而且可维持肿瘤微环境并促进肿瘤生长［1］、调解细胞粘附［2］、能增强上皮细胞的运动能力［3］，从而参与肿

6、瘤的侵袭转移。还有研究证实MMP-2、MMP-9和MT1-MMP等在血管形成过程中发挥重要作用［4］。细胞外基质金属蛋白酶诱导剂EMMPRIN可以通过刺激MMP和VEGF的表达，促进肿瘤血管形成和肿瘤生长［5］。而强力霉素除了具有广谱的抗菌作用外，还有抑制基质金属蛋白酶的功能［6-8］。本研究采用免疫组化、MTT及Millicell小室法，观察强力霉素对人肺癌细胞系A549细胞表达基质金属蛋白酶2(MMP2)及肿瘤的生长、侵袭和转移的影响,为强力霉素治疗肺癌提供理论依据。　　1材料和方法　　1.1材料　　强力霉素、DMEM、MTT试剂、DMSO均购自Sigma公司；胎牛

7、血清购自康利达生物制品公司；胰酶、Millicell-pore购自美国Costar公司；SABC免疫组化试剂盒及抗MMP-2单抗购自武汉博思德公司；Matrigel为BectonDickinson公司产品。其余试剂均为国产分析纯。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养：肺腺癌细胞系A549细胞由第四军医大学口腔生物教研室提供。细胞培养于DMEM培养液中(含100mL／L胎牛血清、100U／mL青霉素、100mg／mL链霉素)，在37℃体积分数为5％CO2培养箱内培养。12　　1.2.2药物对细胞增殖作用的测定：取对数生长期的A549细胞，用