CCR7对Huh-7肝癌细胞系增殖和侵袭的影响-论文.pdf

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1、第25卷肝胆胰外科杂志第6期实验研究·CCR7对Huh-7肝癌细胞系增殖和侵袭的影响张伯，周萃阶，刘秋华，蒋维，李建伟(苏州大学附属张家港医院普外科，江苏张家港215600)[摘要]目的探讨CCR7对肝细胞肝癌转移的影响。方法构建siRNA—CCR7载体，稳定转染表达CCR7的肿瘤细胞株Huh一7，用MTT法检测沉默CCR7基因对Huh一7肝癌细胞系增殖的影响，通过趋化侵袭实验检测其对肿瘤细胞株Huh一7趋化、侵袭能力的影响。结果通过抑制Huh一7细胞CCR7的表达，稳定转染siRNA—CCR7能有效抑制Huh一7细胞的增殖，并能抑制CCL21刺激的

2、趋化和侵袭能力。结论沉默CCR7基因能有效抑制肝癌细胞增殖和侵袭性。[关键词]小干扰RNA；趋化因子受体7；Huh一7细胞；肿瘤转移[中图分类号]R735．7[文献标识码]A[文章编号]1007—1954(2013)一0480—03EfectofCCR7onproliferationandinvasivenessinhepatocellularcarcinomaHuh-7cellsZHANGrJ．ZHOUCui-Jie，L1UQiu—Hua，ela1．DepartmentofGeneralSurgery，ZhangJiagangHospitalAff

3、iliatedtoSoochowUniversity，Zhangjiagang，Jiangsu215600，ChinaObjectiveToinvestigatethefunctionofCCR7inhepatocellularcarcinomametastasisandinvasionMethodsThevectorofsiRNA—CCR7wasbuilt．thetumorcelllineHuh一7ofCC：R7withstabilitywastransfectedandpresented，theeffectofsilenceCCR7geneonp

4、roliferationofHuh一7celllinewasmeasuredbyM1Tr，influenceoftheabilityofCCR7whichwouldinvadeonHuh．7celllinebvCCR7wasdetected．ResultsTheHuh一7couldberestrainedeffectivelybyrestrainingtheexpressofHuh一7toCCR7withstablingandtransferringthesiRNA—CCR7．andalsorestrainthestimulativechemoatt

5、ractantandinvasionofCCL21．ConclusionTheproliferationandinvasioninhepatocellularcarcinomacanbeeffectivelyrestrainedbysilencingtheCCR7gene．smallinterferingRNA；CCchemokinereceptor7：Huh-7cell；tumormetastasisCCR7是7次跨膜受体G蛋白偶联受体，是cc家1．1材料与试剂族趋化因子受体的成员之一，通过与其配体CCL21相pGPH1／GFP／Neo质粒(Gen

6、ePharma公司)；Huh一互作用在淋巴细胞的归巢过程中起重要作用。CCR77肝癌细胞，购于上海生物研究所；TRIzol试剂盒蛋白表达异常与恶性肿瘤的浸润及淋巴转移密切相(Gibco公司)；Lipofectamine2000脂质体转染试剂关⋯，然而CCR7是否与肝细胞性肝癌(HCC)的淋巴(Invitrogen公司)；SYBRGreenPCRKit(Takara结转移相关，尚无定论。本研究通过体外干扰Huh_7公司)；CCR7单克隆抗体(R&D公司)；CCL21(Cytolab肝癌细胞系CCR7的表达，评价了CCR7的表达对体外公司)；8．0／zm

7、孔径多聚碳酸酯膜(Neutroprobe公HCC细胞的趋化与侵袭的影响，为进一步研究HCC向司)；Matrigel胶(BD公司)；24孔趋化小室(Millipore淋巴结转移的机制奠定了基础。公司)。1．2实验方法l材料和方法1．2．1构建和鉴定siRNA-CCR7表达质粒；首先在美国国立生物技术信息中~L,NCBI数据库中获取人CCR7cDNA[收稿日期]2O13—07—08的序列全长(序列号：NM一001838)。根据CCR7核苷[基金项目]苏州市科技发展计划项目(sYsD20l0011)。酸，参考siRNA的设计策略，并应用RNAstructu

8、re4．2[作者简介]张伯(1977一)，男，江苏沭阳人，副主任医师，软件对其二级结构进行预测，最终选择2个