下调GnTIVa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响-论文.pdf

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1、中国肿瘤生物治疗杂志http：／／www．biother．orgChinJCancerBiother，Dec．2013，Vo1．20，No．6·673·DOI：10．3872／j．issn．1007-385X．2013．06．007·基础研究·下调GnTIVa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响樊建慧。，汪淑晶，于生金，何静娜，郑伟龙，张嘉宁(1．大连医科大学糖生物学研究所生物化学与分子生物学教研室，辽宁大连116044；2．辽东学院医学院基础医学部，辽宁丹东118003)[摘要]目的：探讨慢病毒介导的N一乙酰氨基葡萄

2、糖转移酶Ⅳa(N—acetylglucosaminyltran8ferase1Va，GnT1Va)表达下调对小鼠肝癌Hca—F细胞体外增殖及侵袭能力的影响。方法：针对GnTIVa的编码基因Mgat4a，构建含shRNA干扰序列的慢病毒表达载体pl13．7／Mgat4a—shRNA并包装慢病毒颗粒，感染Hca—F细胞。RT—PCR及流式细胞术分别检测Mgat4a—shRNA重组慢病毒感染对Hca—F细胞Mgat4amRNA及GriT1Va表达的影响，CCK一8法和Transwell侵袭实验分别检测Mgat4a—shRNA重组

3、慢病毒感染在体外对Hca—F细胞增殖和侵袭能力的影响。结果：慢病毒能够高效感染小鼠肝癌细胞Hca—F，Mgat4a—shRNA组感染效率达72％。与Hca—F细胞和Mock—shRNA组相比，Mgat4a—shRNA组细胞内Mgat4amRNA[(0．53±0．2)vs(2．97±0．2)、(2．904-0．1)；均P<0．05]和GriTIVa[(47．80±2．25)vs(394．61±5．27)、(378．614-4．38)；均P<0．05]表达显著降低；增殖能力[细胞增殖抑制率：(46．9±0．02)％us(0．8

4、2±0．03)％、0，P<0．01]和体外侵袭能力[穿过滤膜的细胞数：(184-3)128(424-4)、(38±3)个，均P<0．05]显著下降。结论：慢病毒介导shRNA下调GnTIVa的表达能够抑制小鼠肝癌细胞Hca—F的增殖及体外侵袭。[关键词]N一乙酰氨基葡萄糖转移酶IVa；肝癌；增殖；Hca—F细胞；侵袭；慢病毒；RNAi[中图分类号]R735．7；R730．54[文献标志码]A[文章编号]1007—385X(2013)06-0673—06Effectsofdown-regulationoflentivirus

5、··mediatedGnTIVaontheproliferationandinvasionofmousehepatomaHca-FcellsFanJianhui，WangShujing。，YuShengjin，HeJingna，ZhengWeilong，ZhangJianing(1．InstituteofGlycobiolo—gY，DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，DalianMedicalUniversity，Dalian116044，Liaoning，China；2

6、．DepartmentofBasicMedicalSciences，MedicalCollegeofEasternLiaoningUniversity，Dandong118000，Liaoning，China)[Abstract]objective：Toinvestigatetheeffectofdown—regulationoflentivirus—mediatedN—acetylglucosaminyltrans-feraseIVa(GnTIVa)ontheproliferationandinvasionofmouse

7、hepatomaHca—Fcellsvitro．Methods：Expressionplasmidpl13．7／Mgat4a-shRNAwithinterferenceshRNAsequencesgenetargetMgat4agene，wereencodingGnTIVawasconstructed．TheRNAilentiviralparticleswerepackagedtoinfectHca—Fcells．TheeffectofMgat4a—shRNAinfectionontheMgat4amRNAandGnTⅣa

8、expressionofHca—FcellswasdetectedbyRT—PCRandflowcytometry，respectively．Theeffectofrecombinantlentiviralinfectionontheproliferationandinvasioncapabilityo