干预wip1基因对人肝癌细胞系huh-7的影响研究

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1、分类号：R735．7单位代码：10422密级：学号：2012136080菇办i硕士学位论文论文题目：干预Wip1基因对人肝癌细胞系Huh-7的影响研究ThestudyontheinterventionofWiplgeneinhumanhepatomacelllineHuh·7作者姓名本折千口培养单位山东大学医学院专业名称外科学(肝胆)指导教师刘军教授合作导师2015年5月4日万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过

2、的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：查堑El期：呈堕：三：兰!关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：生堑导师签名：万方数据山东大学硕士学位论文目录中文摘要1英文摘要3符号说

3、明6—1上．—jo一刚舌8材料与方法11结果2l讨{仑23结论27附图及附表28参考文献36致谢40攻读硕士学位期间发表的学术论文目录．41万方数据山东大学硕士学位论文CATALOGUEChineseAbstract．．1EnglishAbstract．．．．．3SignDemonstration．6Introduction．．．．8MaterialsandMethods．．．．11Results．．21Discussions23Conclusions．27DrawingsandFigures．．28References36Acknowledg

4、ments．．40，一●●●●●^一一一一1hepublicationsoIacademicdissertation．．．．．．．．．．．．．．．．．41万方数据山东大学硕士学位论文干预Wipl基因对人肝癌细胞系Huh．7的影响研究硕士研究生李哲专业外科学(肝胆)导师刘军教授中文摘要目的：通过使用靶向质粒，siRNA转染的方法，干预人肝癌细胞系Huh一7细胞中Wipl基因的表达，使其表达分别上调及下调。在验证Wipl基因被干预以后，观察Huh一7细胞在wipl蛋白表达、增殖能力、迁移能力、侵袭能力等细胞生物学特性方面的变化。初步探讨导致Huh-

5、7细胞发生细胞生物学特性变化的原因及机制，为后期的动物实验提供理论支持，为肝癌的临床治疗、干预提供一种新的方法及思路。方法：通过转染试剂NanoFectionTransfectionReagent(ExCell)的介导，分别将靶向Wipl基因的质粒及siRNA转染入人肝癌细胞株Huh．7细胞。靶向Wipl基因的质粒能够上调Wipl基因表达，而siRNA则通过介导wipl相关mRNA的降解从而下调Wipl基因的表达。在转染完成24h后，行PCR实验，验证Huh．7细胞内Wipl基因mRNA的表达量的是否发生了变化。若其表达量有变化，则在转染完成4

6、8h后，行Westernblot实验，检测Huh．7细胞内wipl蛋白的表达量有无变化；转染完成24h后，行CCK．8细胞增殖．毒性检测实验，检测Huh．7细胞在24h、48h、72h三个时间段内细胞的增殖能力有无变化；转染完成24h后，行细胞划痕实验，检测Huh．7细胞在24h、48h、72h三个时间段内细胞的迁移能力有无变化；转染完成24h后，行Transwell细胞侵袭实验，检测Huh一7细胞在24h内的细胞侵袭能力有无变化。结果：质粒转染完成24h后，Huh．7细胞内Wipl基因mRNA的表达量较未转染时上调。质粒转染完成48h后，Hu

7、h．7细胞内wipl蛋白的表达量较未转染时上调。CCK．8细胞增殖．毒性检测实验方面，在各个时间观察段及各个细胞数量梯度中，质粒转染组在450nm处的吸光度(OD值)均较未转染组高，各个时万方数据山东大学硕二仁学位论文间段及各个细胞数量梯度组的增殖率在107．42％．176．36％之间，大多集中在130％左右。细胞划痕实验方面，未转染组Huh．7细胞与质粒转染组Huh．7细胞在24h、48h、72h处的划痕迁移距离分别为：34．78±4．77lamVS61．60+2．02um(仁8．97，P<0．05)；33．98±3．48lamVS64．75

8、±4．67lam(t=-9．19，P<0．05)；35．49±0．90umVS67．89±4．23lam(t=13．01，P<0．05)。Transw