慢病毒介导的 GATA6基因沉默对肝癌 Huh-7细胞凋亡的影响.pdf

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1、·938·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2015，31(5)：938-942[文章编号]1000-4718(2015)05-0938—05慢病毒介导的GATA6基因沉默对肝癌Huh一7细胞凋亡的影响；}=才锦麟，阿力亚，何强(中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080)[摘要]目的：研究GATA6基因沉默对肝癌Huh-7细胞凋亡的影响，同时探讨可能的作用机制。方法：构建靶向GATA6基因的慢病毒干扰载体，用流式细胞术确定转染效率，用RT—PCR和Westernb

2、lotting法检测其对人类肝细胞癌细胞株Huh-7的干扰效果，流式细胞术检测细胞凋亡比例，Westernblotting法检测各转染组Huh-7细胞NF—KB及Bcl-2蛋白表达。结果：靶向GATA6基因的慢病毒干扰载体感染肝癌Huh-7细胞后，转染效率为57．4％。GATA6在mRNA和蛋白水平的表达明显下降。GATA6沉默的肝癌Huh-7细胞凋亡比例增加(P<0．05)，NF．KB和Bcl-2蛋白水平表达降低。结论：利用慢病毒载体干扰技术沉默GATA6基因的表达可以明显促进Huh-7细胞凋亡，其机制可能通过NF

3、—KB信号通路调节凋亡相关蛋白的表达，进而影响细胞的凋亡。靶向GATA6的RNA干扰技术在肝癌的基因治疗中具有一定的研究价值。[关键词]GATA6基因；慢病毒；RNA干扰；肝细胞癌[中图分类号]R363[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2015．05．030EfectsofGATA6silencingmediatedbylentivirusonapoptosisofhumanlivercancerHuhcellsCAIJin—lin，Aliya，HEQiang(Departme

4、ntofHepatobiliarySurgery，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China．E—mail：lheqiang@hotmail．con)[ABSTRACT]AIM：ToexploretheeffectofGATA6genesilencingonapoptosisofhepatocellularcarcinomaHuh一7cells．METHODS：RNAinterferencevectorsofthetarg

5、etgeneGATA6mediatedbylentiviruswereconstructedinvitrototransfectthehepatoeellularcarcinomacelllineHuh-7．Theapoptoticrateoftransfectedcellswasmeasuredbyflowcytome—try．TheproteinexpressionofGATA6．NF—KBandBcl-2intransfectedceilswasdeterminedbyWesternblotting．RE-SU

6、LTS：ThetransfectionefficiencyWas57．4％．ThemRNAandproteinexpressionofGATA6reducedsignificantlyafterthecarcinomacelllineHuh-7beingtransfectedbyRNAinterferencevectorsmediatedbylentivirns．TheapoptoticrateofthecarcinomacellswithsilentGATA6genewassignificantlyincrease

7、d(P<0．05)．TheproteinexpressionlevelsofNF-KBandBcl-2werealsosignificantlydecreased．CONCLUSION：Lentiviralvector—mediatedRNAinterferenceofGATA6hasaninhibitoryeffectontheexpressionofthegeneitself，andpromotestheapoptosisofhepatocellularcarcinomacells．Regu—lationofth

8、eapoptosis—relatedproteinexpressionbytheNF-KBsignalingtoinfluencetheproliferationandapoptosisofhepa·-tocellularcarcinomacellsmightbeoneofthepossiblemechanisms．[KEYWORDS]GATA