扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响.pdf

《扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、实验研究扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响杨骏薛刚刘杰石建（南京中医药大学附属如皋市中医院，江苏如皋226500）摘要目的：研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响。方法：应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响，应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响，应用Westernbolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果：与空白组比较，扶正消积胶囊作用A549细胞24h后，能显著抑制A549细胞的增殖，且这种抑制成浓度依赖关系。Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡，且呈现

2、浓度依赖关系。Westernbolt结果显示，扶正消积胶囊能上调Bax表达，下调Bcl-2表达，激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性。结论：扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡，其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的。关键词扶正消积胶囊A549细胞细胞增殖细胞凋亡肺癌细胞株实验研究中图分类号R734.2文献标志码A文章编号1672-397X（2017）01-0073-03肺癌是常见的恶性肿瘤之一，有统计表明其发（MTT），Biosharp公司；β-actin一抗，美国Sigma公[1-2]病率居各类肿瘤之首

3、。目前治疗肺癌的主要手段司；半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）、是手术、化疗、放疗、分子靶向治疗等。近年来，中医caspase-9、polyADP-ribosepolymerase（PARP）、Bax药治疗肺癌已被证实在提高生活质量和改善临床一抗，美国CellSignaling公司；Bcl-2一抗，美国[3]症状等方面有肯定的疗效。扶正消积胶囊为我院santacruz公司；山羊抗鼠二抗、山羊抗兔二抗，北京院内制剂，具有益气健脾、解毒消积、活血通络、抗中杉生物技术公司。其余试剂均为国产分析纯。癌止痛之效，临床治疗肺癌、肝癌、食管癌、胃癌等2实验方法[4]肿瘤取得了较好的疗效。

4、本研究以体外实验的方2.1MTT法检测扶正消积胶囊对人肺癌细胞A549法，探讨扶正消积胶囊治疗肺癌的相关分子机制，增殖的影响将对数期生长的A549细胞接种于963以期为临床治疗提供实验依据。孔板，每孔8×10个细胞，待其贴壁后，实验组加入1实验材料不同浓度的扶正消积胶囊（浓度依次为5、2.5、1.25、1.1药物制备扶正消积胶囊（药物组成：黄芪，蛇0.625mg/mL）以及浓度为1‰二甲基亚砜（DMSO），舌草，水红花子，党参，生大黄，三棱，炒薏苡仁，莪对照组加入不含任何药物的1640完全培养液，继术，蜈蚣，炙鳖甲，西洋参，参三七，全蝎）为本院自续培养24h后，每孔再加入120μL含MTT的细

5、胞主研发的院内制剂，规格：0.5g/粒，苏药制字：培养液，于酶标仪上检测490nm波长吸光值。设1‰Z04001609，批号：100614。临用前用完全培养基稀DMSO为阴性对照组，不加任何药物的培养液组为释成所需浓度。空白对照组。计算扶正消积胶囊对人肺癌细胞A5491.2细胞株人肺癌细胞株A549细胞购自中研增殖的抑制率，实验重复3次。所，培养材料：含10%小牛血清以及1%双抗的16402.2Annexin-V/PI双染法联合流式细胞仪检测人5培养液，取对数生长期的细胞进行实验。肺癌细胞A549的凋亡比率将细胞个数为3×101.3材料及试剂1640培养液、小牛血清、双抗，个A549细胞接种于

6、直径为6cm的培养皿，待细胞美国Gibco公司；0.25%胰酶、四甲基偶氮唑蓝贴壁后，设2个给药组（扶正消积胶囊5mg/mL、基金项目：如皋市科技计划项目[SRG（15）3018]2017年总第49卷第1期73实验研究2.5mg/mL）以及1个5-FU阳性对照组（50μg/mL），14.68%，与阳性对照组相比差异具有统计学意义1个空白对照组，继续培养24h后，离心收集细胞，（P＜0.05），且随着给药浓度的增加早期凋亡率呈上磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3次，每个皿中加入升趋势，呈浓度依赖关系。见图1。BindingBuffer（10mmol/LHepes/NaOH，pH7.4，140mmol/

7、LNaCl，2.5mmol/LCaCl2）500μL重悬细胞，再加入5μLAnnexin-V以及5μLPI，避光振荡10min，上流式细胞仪检测细胞凋亡情况。2.3WesternBolt实验提取各组浓度相关蛋白（浓度分别为5mg/mL，2.5mg/mL），随后用Bradford图1Annexin-V/PI双染法联合流式细胞仪检测扶正消积胶囊对人肺癌细胞A549的凋亡比率法测取每组蛋白浓度，各组取2