AFMC对TRAI诱导肺癌A549细胞凋亡的影响.pdf

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1、分类号学校代码密级学号AFMC对TRAIL诱导肺癌A549细胞凋亡的影响Effectsof5-Allyl--7——gen--difluoromethoxy·-chrysinonTRAIL--inducedapoptosisinLungCancerA549CellLine指导教师姓名、职称堡坚拴鏊撞研究方向呼亟生理湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一一年四月AFMC对TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡的影响摘要j!

2、

3、IIIIIIIIIIY1918,lllw14in’uH7nmill目的：观察5．烯丙基．7．二氟甲氧基白杨素(5-allyl一7．gen-difluoromethoxychr

4、ysin，AFMC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(n盯-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL)合用对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。并探讨其机制是否涉及死亡受体5(DR5)的上调。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞和永生化二倍体人胚肺WI．38细胞。全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性。流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA核小体间断裂。WestemBloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果：通过测定细胞培养液LDH活性的细胞毒性实验结果显示，AFMC、TRAIL对A549细胞毒性的半数有效浓度

5、(EC50值)分别为13Ⅳnol／L、1850ng／mL，1．09mol／LAFMC预孵育30min，再加入TRAIL处理24h，EC50值为36ng／mL，合并用药效应指数(CI)值为0．076。白杨素(5，7．二羟基黄酮，5，7-dihydroxyflavone，chrysin，ChR)对A549细胞毒性EC50为266pmol／L，10lmaol／LChR与TRAIL合用的EC50值为45ng／rr正，CI值为0．004。单用亚毒性浓度的AFMC(1．0IJmol／L)、TRAIL(30ng／mL)或者两者合用对WI-38细胞毒性分别为(7．214-1．38)％、(6．524-1．25

6、)％、(6．664-1．29)％，与溶媒组(O．2％DMSO，(5．344-1．13)％)Lg较，差异无统计学意义(P>O．05)。流式细胞术分析结果发现：AFMC((1．0wnol／L))、TRAIL((30ng／mL))以及两者合用24h，A549细胞凋亡率即亚二倍体DNA含量细胞(sub．G1)百分率分别为(2．534-0．35)％、(2．694-0．52)％、(37．80士1．78)％。其中AFMC((1．0“mot／C))和TRAIL((30ng／mL))联用24h，A549细胞sub．Gl百分率在作用12h后开始增加，24h达高峰。DR5特异性阻断剂DR5／Fc嵌合蛋i兰l(1硕

7、士学位论文舭)能使亚毒性浓度的AFMC与TRAIL合用的A549细胞凋亡率从(37．804-1．78)％下降至lJ(7．61+O．32)％(P<0．05)；而AFMC((1．0pmol／L))、TRAIL((30ng／mL))以及两者合用24h处理WI．38细胞凋亡率分别为(O．31+0．08)％、(0．29+0．05)％、(0．35+0．12)％。与溶媒组(O．2％DMSO，(0．314-0．05)％)Lk较，差异无统计学意义妒>O．05)。DNA琼脂糖凝胶电泳显示：AFMC(1．0lxrnol／L)联合TRAIL(30ng／mL)处理A549细胞24h，展示出典型DNA梯形条带图谱。We

8、sternBlot分析的结果发现：AFMC呈浓度和时间依赖性上调A549细胞DR5表达水平，DR5／Fc嵌合蛋白能有效阻断AFMC对DR5表达的上调效应。而AFMC对WI．38细胞DR5表达无明显影响。结论：1．亚细胞毒性浓度的AFMC具有选择性增强TRAIL对A549细胞毒性作用，其作用强于先导化合物ChR。2．亚细胞毒性浓度的AFMC具有选择性增强TRAIL诱导A549细胞凋亡作用。3．AFMC敏化TRAIL诱导A549细胞凋亡作用机制与其上调DR5表达有关。关键词：肺癌；5一烯丙基．7．二氟甲氧基白杨素；白杨素；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；细胞凋亡IIAFMC对TRAIL诱导人肺癌A

9、549细胞凋亡的影响Abstractobjective：Toinvestigatetheeffectsofthecombinationtreatmentwith5-allyl·-7·-gen-·difluoromethoxychrysin(AFMC)andtumornecrosisfactor-relatedapoptosis—inducingligand(TRAIL)onapoptosisofhumanlu