ilk对lps诱导肺癌a549细胞分泌免疫逃逸相关因子的影响

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分类号：堕丝UDC：密级：重庆医科大学硕士学位论文论文题目作者姓名ILK对LPS诱导肺癌A549细胞分泌免疫逃逸相关因子的影响刘璨指导教师姓名(职称、单位名称)陈全副教授重庆医科大学免疫学教研室重庆市渝中区医学院路1号400016申请学位级别硕士学科、专业名称免疫学论文答辩年月2012年5月2012年4月 重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：自堡．日期：c2。照明哆订学位论文作者签名：型!兰日期：皇!唑塑!至!!学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期： 目录英汉缩略语名词对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6论文正文：ILK对LPS诱导肺癌A549细胞分泌免疫逃逸相关因子的影响⋯⋯⋯8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．132结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。173讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。20全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35 重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写AaabpBSA℃C02dddH20衄20DEPCDNAdNTPdsDNAE．coliECLELISAEpgGlyGVh英汉缩略语名词对照英文全称AbsorbanceAminoacidBasepair中文全称吸光度氨基酸碱基对Bovineserumalbumin牛血清白蛋白Centi—degreeCarbondioxideDayDoubledistilledwaterDeionizedwater摄氏度二氧化碳天数双蒸水去离子水Diethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DeoxyribonucleicacidDeoxyribonucleosidetriphosphateDouble．strandDNAEscherichiacoliElectrochemiluminescenceEnzyme—LinkedImmunosorbnentAssayEppendorfGramGlycinGoldviewHour脱氧核糖核酸脱氧核糖三磷酸双链DNA大肠杆菌电子化学发光酶联接免疫吸附剂测试微量离心管克甘氨酸Goldview核酸染料小时 重庆医科大学硕士研究生学位论文HARHRPILKIL．6lLPSMmgmlnmlmMmRNAngN．SPAGEPCRPHPMSFRNARNasinPrimeSTARODHyperacuterejection超急性排斥反应Horseradishperoxidase辣根过氧化物酶Integrin—linkedkinase整合素连接激酶inter-leukin．6LiterlipopolysaccharideMol／LMilligramMinuteMillitermmolMessengerribonucleicacidNanogramNormalsaline(0．9％NaCl)PolyacrylamidegelelectrophoresisPolymerasechainreactionPowerofhydrogenPheylmethylsulfonylfluorideRibonucleicacidRNaseinhibitorPrimeSTARHSDNApolymeraseopticaldensityRoswellparkmemorialinstitute16402白细胞介素．6升脂多糖摩尔／升毫克分钟毫升毫摩尔，千分之一克分子信使核糖核酸毫微克(纳克)生理盐水聚丙烯酰胺凝胶电泳聚合酶链反应酸碱度蛋白酶抑制剂核糖核酸RNA酶抑制剂高保真DNA聚合酶光密度RPMll640培养基 重庆医科大学硕士研究生学位论文ImPCRS眦TaqTLIbTGF-p“lgmolU、腿VEGFReversetranscriptionPCR逆转录PCRSecond秒TrisacetatebufferTris乙酸电泳缓冲液Thermus．aquaticuSDNA耐热DNA聚合酶polymeraseToll．1ikereceptorsToll样受体Transforminggrowthfactor-B转化生长因子-DMicroliterMicromolUnitWestern．blotvascularendothelialgrowthfactor3微升微摩尔单位免疫印迹血管内皮生长因子 重庆医科大学硕士研究生学位论文ILK对LPS诱导肺癌A549细胞产生免疫逃逸相关因子的影响摘要目的：以ILK过表达肺腺癌A549细胞模型为基础，探讨ILK对LPS诱导肺癌A549细胞产生VEGF、TGF一13及IL-6等免疫逃逸相关细胞因子的影响。方法：以稳定过表达ILK的肺癌A549细胞株为实验组细胞，对照组细胞设为空白A549细胞，经LPS诱导培养后(设生理盐水诱导培养为阴性对照)，分别收集培养上清液和细胞裂解液，用ELISA法定量检测VEGF、TGF一13及IL-6等免疫逃逸相关细胞因子的表达情况，最后统计分析检测结果。结果：以独立样本t检验分析ELISA定量检测VEGF、TGF-13及IL一6的结果，各组细胞裂解液与培养上清液间比较，三种因子均无显著性差异(P>0．05)；稳定过表达ILKA549细胞组与空白A549细胞组相比较，三种因子均明显增高，具有统计学意义(P<0．05)；LPS刺激的A549空白细胞与生理盐水刺激的空白A549细胞组相比，VEGF、IL．6 重庆医科大学硕士研究生学位论文和TGF-p的表达有显著性差异(PO．05)；TheA549cellslinewithover-expressingILKcomparedwithblankA549cells，thethreefactorsweresignificantlyhigher(P<0．05)；TheblankA549cellsstimulatedbyLPScomparedwithonesstimulatedbyNScontrol，thereweresignificantdifferencesintheexpressionofVEGF,IL-6andTGF-13(P0．05)(见表1．1)。(2)稳定过表达ILK的肺癌A549细胞与空A549细胞比较，VEGF、TGF．B、IL．6均有增高，差异具有统计学意义(P<0．05)(见表1．1及图1．1)。(3)过表达ILK组A549细胞经LPS刺激后，与NS刺激后比较，细胞因子VEGF、TGF．D、IL6的表达均有显著性增高(PO．05；与对照组(空A549细胞)比较，+PO．05)。A549细胞过表达ILK与空白A549细胞比较，VEGF增高31．1％，TGF-p增高29．4％，IL-6增高33．9％，差异具有统计学意义(P