cd38缺失对lps诱导巨噬细胞炎性因子表达和分泌的影响及其分子机制

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1、ADissertationPresentedMaior"PharmacolmPvtic●■■■■■■■■■■■■■●■■■■■■■■■■■■■■■●●■■■■●一Sul：DoctorHong-BoXinSupervisor：Doctor______SubmittedtotheGraduateSchoolofNanchangUniversityfortheDegreeof№～STEROFMEDICINEJune，2013SchoolofMedicine，NanchangUniversity,Nanchang，330088，丛：China学位论文独创性声明lIflJlIFIlIJllllm

2、llJllllJIJlllflIrlllrlllljiY2427519本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：幸尊杪签字日期：Ⅺ，，年，月’日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅

3、。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：褥釉导臌c矧：手燃签字日期：yI≥年6月q日签字日期：M年／月摘要背景与目的：动脉粥样硬化是许多心血管疾病的重要成因。大量的实验证据和临床资料表明，炎症反应在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用，其机制与巨

4、噬细胞等炎性细胞浸润并分泌大量炎性因子，促使泡沫细胞生成等密切相关。CD38是具有ADPR(ADP．ribosyl)环化酶和水解酶活性的双功能酶，它可分别催化NAD+生成cADPR和催化cADPR降解成ADPR，其酶活性位点均定位于胞外结构域。我们的前期实验显示，CD38基因缺失可使高脂饮食诱导的ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化损伤明显加重。本文旨在探讨CD38对巨噬细胞活化的影响及其可能的分子机制，从而为进一步阐明CD38在动脉粥样硬化形成中的作用及其机制提供线索和实验依据。方法：1．巨噬细胞的诱导和培养：给野生型和CD38基因敲除小鼠腹腔注射O．5ml3％巯基乙醇酸钠诱导其巨噬细胞

5、分泌，三天后收集小鼠腹腔的巨噬细胞并进行体外培养，经鉴定后用于后续实验。2．巨噬细胞基因表达及炎性因子分泌：取原代培养的腹腔巨噬细胞并用LPS(199／m1)对其进行刺激，实验分为4组每组3个样本：①野生型(W．T．)未刺激组；②野生型(w．T．)LPS刺激组；③CD38士未刺激组；@CD38士LPS刺激组。利用RT．PCR或实时荧光定量PCR技术对TLR4和相关炎性因子如TNF．0【，IL．1p及巨噬细胞炎症趋化因子MCP．1的mRNA表达量进行检测，同时用WesternBlot技术对NF．r,B蛋白表达量进行分析。结果：1．镜下观察细胞形态，与文献描述相符，确认为巨噬细胞。2．CD

6、38缺失使LPS诱导巨噬细胞炎性因子分泌及相关蛋白表达升高@LPS刺激后W．T．组与CD38小组均出现TLR4表达量升高，炎性因子TNF．0t，IL．1D及炎症趋化因子MCP．1分泌增加；②与LPS刺激W．T．组比较，CD38斗组中TLR4及NF．1cB表达量显著升高；③LPS刺激后CD384组炎性因子TNF．0【，IL．113及炎症趋化因子MCP．1分泌量较W．T．组增加。结论：LPS可明显诱导CD38斗小鼠原代培养巨噬细胞的M1型炎性因子分泌，提示CD38基因缺失可显著促进巨噬细胞介导的炎性反应，其机制可能与摘要CD38缺失诱导巨噬细胞TLR4-NF．r,B通路活化，进而促进炎性因

7、子的合成与分泌有关。关键词：CD38；动脉粥样硬化；巨噬细胞；炎性反应：TLR4；NF一1cBAbstractABSTRACTBackgroundandObjective：Atherosclerosisisallimportantcauseofmanycardiovasculardiseases．Numerousexperimentalevidenceandclinicalresourcesindicatedthatinflammationre